BAL31 核酸酶消化法产生双向缺失突变体实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方案使用核酸酶 BAL31(从海洋细菌 Alteromonas espejiana BAL31 中纯化）在克隆的 DNA 片段中产生单向或双向缺失。BAL31 是一个复合酶，它以非同步的方式消化双链靶 DNA。因此与诸如外切核酸酶Ⅲ这类的加工酶相比，BAL31 产生的缺失更具有不均一性（请见方案 9)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

BAL31 核酸酶消化法产生双向缺失突变体实验

材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1, 将贮存液稀释到合适的浓度。 5XBAL31 缓冲液 2.5mol/LNaCl 62.5 mmol/LCaCl2 62.5 mmol/LMgCl2 100 mmol/LTris-Cl(pH8.0) 有 4 种 dNTP 的溶液，每种浓度为 0.5 mmol/L EGTA(0.5mol/L,pH8.0) 乙醇酚：氯仿（1:1