用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序（有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备，请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

材料缓充液和溶液去离子蒸馏水（冰预冷）二硫苏糖醇（DTT)(100 mmol/L) dNTP 和 ddNTP，dNTP(0.5 mmol/L) 和 ddNTP(0.5 mmol/L) 储液 5X 标记混合液和 ddNTP 延伸/终止混合液（ddCTP、ddTTP、ddATP、ddGTP) 这些反应混合液可按表 12-5 给出的溶液体积混合配制。甲酰胺上样缓冲液测序酶稀释缓冲液