在质粒载体中进行定向克隆实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 质粒的克隆位点有 46 个之多，而且还可以设计含有更多克隆位点的多聚接头（Brosius 1992 ) ]，因此一般来说总是能够找到一个带有与某一特定外源 DNA 片段末端相匹配的酶切位点的质粒载体。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

在质粒载体中进行定向克隆实验

一、材料1. 缓冲液和溶液ATP (10 mmol/L)，乙醇，苯酚：氯仿（1:1, V/V)，乙酸钠（3 mol/L，pH 5.2)，TE ( pH 8.0)。2. 酶与缓冲液T4 噬菌体 DNA 连接酶，限制性内切核酸酶3. 凝胶琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶。4. 核酸和单核苷酸载体 DNA ( 质粒），外源或目的 DNA 片段。5. 专用设备旋转柱层析装置，温度可调 16℃ 的水浴装置。二、方