YAC 克隆的分析实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 用接种棒将含重组载体pYAC的AB1380菌株划线接种在AHC平板上，倒扣平板于30℃培养，直至长出1~3 mm 大小的红色菌落为止。 2. 短期保存：用Parafilm膜将平板周围封起来，于4℃可保存4~6周。 3. 长期保存：接种一个单独的YAC克隆的菌落于3.2 ml YPD培养基中，在30℃摇床过夜，然后加入1 ml 80%甘油，混匀，再分成0.2~1.0 ml 小份

制备YAC DNA进行Southern印迹分析

1. 接种一个红色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培养基的250 ml 三角烧瓶中，在旋转摇床上30℃ 250 r/min 振荡培养24 h。 2. 扩大培养：取1ml 由步骤1获得的粉红色菌悬液接种于盛有100 ml AHC培养基的 1 000 ml三角烧瓶中，于30℃ 250 r/min摇床培养24 h。 3. 将菌悬液移入2个50 ml 的锥形离心管中，于