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简介
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。(1)将凝胶设置在双重变性条件下,可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变,被广泛应用于基因突变检测及相关研究。(2) 用于癌症和遗传病的筛查及诊断,而且,在癌症(残存性病灶、突变图谱研究等)突变定量实验中还用以检测少数突变。(3)广泛用于分析自然环境中细菌、蓝细菌 ,古菌、微微型真核生物、真核生物和病毒群落的生物多样性。
来源:丁香实验
操作方法
1.PCR反应其中,上游引物加40bp [GC] Clamp。2.PCR产物经琼脂糖凝胶电泳确认。3.垂直变性梯度凝胶电泳变性梯度递增的方向与电泳方向垂直。所使用的胶为6%聚丙烯酰胺凝胶,变性浓度为0-100%。其中,含7 M尿素和40%去离子甲酰胺的胶为100%变性,不含尿素和去离子甲酰胺的胶为0%变性。垂直变性梯度凝胶电泳主要是检测引物的最适解链条件(即变性浓度)。PCR产物加上样缓冲液后上样