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科研学霸天团，48小时有问必答

问关于组织消化后有组织块的问题

天一湖医者

因为胰酶消化时间太长细胞破碎掉了。可以试试不用胰酶，只用胶原酶，减少组织用量。

3 回答178 围观

问组织细胞消化液的注意事项

天一湖医者

消化酶在-20度下，放一个星期左右是没什么问题的，时间再长了不太好。

3 回答158 围观

问细胞降脂模型不好建立，诱导分化不了成熟脂肪细胞，脂滴较小是什么原因

Eason老歌迷

诱导剂一定要选好，不能用甲醇固定，因为甲醇为脂溶剂，可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水，甘油明胶封片。

3 回答71 围观

问可否使用与原先不同的培养基?

以水为师ISD8

可以的，但是不能一下子更换条件。要循循渐进，比如将两种培养基混合，不断换液，不断加大新换培养基的比例，就能更换称新培养条件。

6 回答160 围观

问有小鼠肝kuffer细胞分离的详细步骤么？之前按照一篇硕士毕业论文的操作，一只老鼠只能分300w左右

bamboopiggy

1.将肝脏摘下，置入预热37°C含0.5 g/L 胶原酶IV的孵育液50 mL中，剔除肝包膜和结缔组织，使细胞散落.孵育时间20 min，其间水浴振荡200 r/min.孵育液用200目的不锈钢筛网滤过，得到肝组织细胞悬液.2.将上述肝组织细胞悬液以500 r/min离心10 min，获得细胞团块.加入PBS液50 mL，充分吹打悬浮后，再以50 r/min离心2 min，保留上清液.此时的沉淀为

3 回答999 围观

问细胞出现杆状污染，部分杆状聚集成团，这是啥原因导致的？

Guoood

细胞出现细菌污染，镜下可见杆状细菌在游动，如果不会游动而且培养基清亮则不是污染。杆状成团是因为细胞太密，铺细胞时没有吹打散。

3 回答90 围观

问AC16细胞在换T75瓶后，细胞状态很差，培养基没有变，这是啥原因？

Guoood

大概率是传代的时候消化过了，细胞状态变差。建议稀释胰酶，消化时镜下观察细胞变圆即可终止消化。

3 回答70 围观

问细胞为何生长不均匀?

Keven轩

可能是在细胞放入培养箱之前没有进行八字摇匀，导致细胞在培养皿中分散不均

5 回答628 围观

问细胞生长逐渐变慢是什么原因?

Guoood

细胞密度太低。传代时注意细胞密度不能太稀细胞代龄很高了，也就是细胞老了，随着代数增多，逐渐长的慢传代消化不能太久，容易损伤细胞，建议稀释胰酶，摸索合适时间

4 回答74 围观

问如何判断悬浮细胞状态？

bamboopiggy

悬浮细胞状态好的话，单个细胞呈球形，透亮，没有贴壁，没有变形

4 回答2254 围观

问H9c2细胞培养昨天传代，今天发现有团块，还有一瓶有条黑线，这是污染了，还是有细胞团块呢？

bamboopiggy

黑线基本是掉进去的纤维，hepG2本来就容易聚团，你消化的时候，没有消化开

3 回答199 围观

问如何计算细胞培养密度

Keven轩

可以取一定量含有细胞的重悬液进行梯度稀释后上C6流式器进行计数

4 回答1647 围观

问鸡骨骼肌原代卫星细胞提取及培养

Eason老歌迷

第二个问题:1做好人员的消毒工作，2操作时一定要保持无菌操作的原则，比如说使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生，比如说操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，每开一个试剂要用酒精灯消毒。3可以加入相应的抗生素。第三个问题:这个是要看你的个人经验，你多做几次就知道什么叫适度适量。这个没有一个可丁可卯的一个量化

3 回答178 围观

问成年鸡原代卫星细胞提取后，想确定细胞集中哪种才是卫星细胞

Eason老歌迷

是这样的，你标题有一个问题，然后你在内容里又问了另外两个问题，如果回答你下面两个问题审核就一直不通过。我就先回答一下你的标题的问题，如何区别鸡卫星细胞，卫星细胞又叫“被囊细胞”。了，它是神经胶质细胞的一种。神经节内包囊神经元胞体的一层扁平或立方形细胞。其细胞核为圆形或卵圆形，染色较深。细胞外面有一层基膜。包裹脑、脊神经节内假单极神经元的胞体及其盘曲的突起，在“T”形分支处与许旺氏细胞鞘相连续。在植

3 回答175 围观

问细胞没有及时换液，传代，出现的团块是不是细胞污染

Eason老歌迷

出现这种情况，你需要大概的判断一下，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查，用肉眼看一看，是不是混浊，培养基有没有颜色变化。还可以拿显微镜观察一下，在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起。有可能已经发生了细胞污染，也有可能是操作不当引起的。

3 回答189 围观

问RAW264.7细胞怎么避免过度分化？

浅陌NPKT

1.传代时密度稀一点20%-50%2.传代勤快一点，基本每天都传代，密度达到70%以上就要传了3.血清一定要好的，比如乌拉圭，Gibco的血清4.传代时，胰酶消化时间短一点，只要半贴壁的细胞，贴壁分化的细胞不要，操作轻柔一点，不要刺激到细胞

4 回答486 围观

问 细胞传两代后开始逐渐死亡的原因？

Guoood

传代不能过于频繁。建议等细胞长90%以上再进行传代，否则频繁消化细胞可能会损伤，可适当降低胰酶浓度，比如用灭菌PBS将胰酶稀释一半后使用。还有一种可能就是由于冻存细胞方式不对，复苏细胞质量比较差，不能很好的贴壁，可重新复苏一管好的细胞再试试！

4 回答384 围观

问细胞离心下来的离心速率应为多少?

Eason老歌迷

离心速率一般为300×g(约1000rpm)，以重力加速度g(980;s2)的倍数来表示单位。5 到10 分钟即可，转速过快，时间过长都将造成细胞死亡。

4 回答1130 围观

问冻存细胞复苏解冻时间问题？

zeemee

37度水浴1-3分钟就可以，千万不要温度太高

4 回答141 围观

问细胞传代过程中的问题？

Eason老歌迷

第一个问题:也有可能是支原体污染，或者是培养基pH值过碱化，或者是你没有掌握好传代的时机，细胞老化了；还有就是可能接种细胞起始浓度太低了。第二个问题:首先你打错字了，你想表达的可能是抱团生长是吧。抱团生长有很多原因啊。细胞离心速度过大或时间太长。你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开。你的细胞老化了。或者是你传代的时候没有吹打均匀，细胞团过多等等

4 回答328 围观

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