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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问为什么细胞在T25培养瓶中生长状态较好，但转移至6孔板后，细胞大量漂浮？

Eason老歌迷

可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。另外，跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。或者放在37度水浴锅里孵育也可以，或者是培养板本身的问题，你再换换其他培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了，种板时的血清浓度调高试一下。

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问请问侵袭实验，铺板36小时后，小室内有一坨坨的东西呢？

balalaLy

应该是上室的聚在一起的细胞，不影响结果的

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问这是细胞污染吗

Eason老歌迷

可通过培养基颜色变化、显微镜下观察判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色，而且镜下有小黑点，且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色，镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话，由于最开始支原体生长缓慢，而且显微镜下难以看出。如果不是可能就是你的细胞老化产生的碎片，或者是培养基的问题。

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问膜片钳破膜

Eason老歌迷

我感觉细胞状态是最大的问题，另外接触细胞之后压电极的速度和程度也有些关系，前者需要在你培养和转染条件上多考虑，后者就是手感了~~lipo2000说明书上建议的总质粒：lipo是1:2，但我做过条件优化，我转染用的比例是1:1。当然也要看你转多少个质粒，质粒浓度是多少，因为lipo多了细胞容易死。细胞密度我用70%左右，我的是HEK293B细胞，细胞周期较小，间隔时间就稍微短，理论上越接近对数期越好

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问困境-想研究脊髓神经元，但是缺乏脊髓神经元的细胞系（小鼠）

Eason老歌迷

有这篇文章，你可以参考一下。’大鼠海马神经元与小鼠脊髓发育过程中神经递质属性可塑性的研究’这篇文章是中科院一个研究生的。

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问细胞污染还是正常状态？求指点

秋秋欣欣

看你细胞状态挺好的，应该不是污染，可能就是培养基里的一些蛋白质

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问请问有同盟养过Caco2细胞吗?传第一代还行，慢慢的长不起来了，容易污染，是否是传代过程中的问题，有细胞碎片产生。可以传授经验吗

府宅

Caco-2细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡。该细胞对Glutamin,Sodium Pyruvate还是有较高要求的，及时添加吧。

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问LpS诱导细胞炎症，LPS效果不太明显

Eason老歌迷

我开始用LPS处理也是没有炎症，后来逐渐加长饥饿处理的时间，效果就变得明显了。

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问wb检测，使用B-actin归一化，还是使用用蛋白归一化准确？

秋秋欣欣

Wb检测应该使用内参归一化，可以是beta-actin

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问做wb，flag片段会被150kDa的融合蛋白遮蔽住，而检测不到吗？

Eason老歌迷

如果有，就要看Flag标签是不是正确表达了，如果表达不正确也会影响到检测的。

2 回答117 围观

问用SD大鼠肾皮质组织提取出来的足细胞传代总是不成功是什么原因

Eason老歌迷

一个是你的培养基成分问题二个是你的传代时间的选择。先网上查看ATCC对该细胞的建议，注意你使用的培养基种类、血清浓度及类型、传代细节等。有的细胞对营养物质要求高，需要胎牛血清，而当你使用小牛血清时，可能导致细胞状态不好。消化时间的掌握与经验有关系，难消化的细胞需要放在37℃培养箱里帮助消化。若附近有显微镜，就时不时镜检，看细胞变圆了就可以，再移液器吹打几下就能吹打下来；若没有显微镜，就看培养瓶底

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问细胞加药处理，需要给细胞饥饿处理吗？

bamboopiggy

细胞加药，不需要进行饥饿处理，除非你的药物和血清会发生反应。

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问六孔板一个孔长满细胞大概有多少呀。

Eason老歌迷

可能是有2.5x10的6次方个

3 回答5584 围观

问乳腺癌MCF-7细胞的培养注意事项有哪些

淼uyy

消化时间不能太长，容易让细胞状态不好注意培养瓶的拐角，不容易消化下来。会堆积很多细胞。

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问免疫细胞和肿瘤细胞共培养时，基本注意事项有哪些呢

申东熙老伯

要看你的共培养是直接共培养还是间接共培养，免疫细胞和肿瘤细胞一般是间接共培养，用小室将两种细胞分离开，让细胞因子传递。

2 回答194 围观

问胚胎裂解后怎么提取dna效果最好？

bamboopiggy

看你的实验目的啊，如果是做genotyping，可以直接加鼠尾裂解液就可以。如果想得到genomic DNA进行下一步的实验可以用试剂盒提取。

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问大家相互分享一些能查阅图书的网站？

Eason老歌迷

我一般喜欢去孔夫子旧书网，买书

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问原代树突状细胞7天后收集悬浮细胞重新种板后还需要再加细胞因子嘛

Eason老歌迷

肯定需要的，你都重新种板了，你要不加细胞因子，肯定不行。

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问甲状腺癌细胞不明原因干瘪死亡

Eason老歌迷

感觉是你的培养基不适合,或者是缺少了某个东西，ph值不对?

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问细胞铺板周围密，中间稀问题

Eason老歌迷

我之前刚开始也会有周围密集中间稀的情况，我是用下面办法改善的，不知道对你有没有用。一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个

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