有由_wjx3
有没有大神可以告诉我一下 DRG原代培养的培养基用什么好呀
或者有没有protocol,我这边准备用乳鼠提取DRG来做原代
完全就是科研小白
fghjjd
请问培养浓度是多少?请问你自己分离的神经元还是买到的?
loveliufudan
DRG原代培养是一种用于研究神经细胞和神经胶质细胞的重要方法。以下是一个可能有用的基本的原代培养方案,供您参考:
材料:
DMEM/F12培养基
FBS
神经营养因子(NGF、BDNF等)
阿霉素和链霉素抗生素
酶消化液(例如: papain、collagenase、trypsin 等)
70% 乙醇
磷酸盐缓冲液(PBS)
步骤:
从小鼠胚胎中获取DRG组织,并在PBS中清洗去除血液和其他杂质。
将DRG组织用含有酶消化液的DMEM/F12培养基缓慢转动摇晃,以将其分解成单个细胞。消化时间因所用酶的种类和组织大小而异,一般需要30-90分钟。
停止消化反应,加入等体积的FBS,离心沉淀,去掉上清液。将细胞重悬于DMEM/F12培养基中。
通过细胞计数,计算所需的细胞数,将细胞分配到含有NGF和BDNF等神经营养因子的DMEM/F12培养基中。添加阿霉素和链霉素以防止细菌污染。
在37°C的培养箱中培养,更换新的培养基每2-3天一次,直到细胞达到足够数量。
请注意,以上是一个基本的DRG原代培养方案,具体步骤和条件可能会因研究目的和所用动物的不同而有所差异。
土井挞克树
可以用DMEM完全培养基(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )
有由_wjx3
需要增加其他的营养因子吗?或者直接用神经元培养基可以吗
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