求肝癌原位接种肿瘤细胞的视频或者经验

操作步骤：

(a)正中皮肤切口。

(b)正中肌肉层切口和剑突暴露。

(c)暴露正中肝叶并切除剑突。

(d)使用潮湿的无菌棉签将肝中叶外化。

(e)覆盖正中肝叶（凝胶泡沫注射部位）。

(f)在包膜下区域插入针头并注射20µLHCC细胞/Matrigel溶液。

(g)通过取出无菌棉签检查注射部位和腹膜腔中肝叶的重新定位。

(h)通过连续缝合关闭肌肉层。

注意事项：

1、小鼠皮肤消毒时不要用酒精。缝合完毕后也不要用酒精。

2、小鼠麻醉完成后，要给小鼠做好体温保持。低体温会让小鼠无法复苏。

3、皮肤缝合要勤加练习，不可过松也不可过紧。小鼠感觉到不舒服会低下头咬线头，可能会把伤口咬开。

4、肝脏注射要用胰岛素针而非注射器，胰岛素针的优点在于针头细，注射后不易露出同时计量准确。

5、打细胞的时候要细胞悬液混匀，细胞可用无血清培养基或蒸馏水、或组织胶进行重悬。

使用3%戊巴比妥钠麻醉小鼠（SPF级无胸腺Balb/C裸鼠，雄性，周龄为4-5周，体重为15-20g）。

待麻醉生效后，开腹暴露肝脏，用1ml胰岛素注射针取准备好的细胞注射于裸鼠肝脏内，用5-0丝线缝合伤口，活力碘消毒伤口，将裸鼠放在加热垫上，待清醒后正常饮食饲养。

有详细步骤就够了，然后就自己多做几次就会了。操作步骤：① 用50%基质胶重悬细胞，小鼠（选用Nude mice）10⁶个/20-30ul PBS体系

② 麻醉小鼠：戊巴比妥钠，麻醉后绑定（可用医用胶布）

③ 剃毛后沿腹中线切开皮肤，长度3cm左右，露出剑状软骨，将切口撑开

④ 先用棉签使用生理盐水浸润，然后将肝左叶（最大的一叶）用棉签挑起

⑤ 缓慢注射20ul细胞悬液，注射后停留5s，旋转退出针头，避免细胞回流。注射成功后在肝脏部位一般能看见白色突起

⑥ 注射完毕后消毒腹腔，然后缝合伤口