流式细胞如何调补偿？

流式细胞术中荧光补偿该如何调节？以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢？l调节电压l检测荧光通道的自发荧光l每个荧光通道做单染管对照检测何为单染管对照？l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本shou选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。

（1）先调节阴性对照管：将原补偿清零，首先调节电压，通过调节电压，使阴性群落在FITC和PE双阴性区。（2）FITC单染管：在理想情况下（没有荧光干扰），因检测管中不应该出现PE信号，但实际情况是在FITC与PE的双阳性区出现了荧光信号。这个信号就是PE探测器检测到的FITC信号。此时需要通过调节补偿参数，取合适的补偿强度来抵消PE中的信号。如下图所示，调节补偿（PE- %FITC ),使得两群细胞FL2的Mean/Median值相同或相近，或通过经验判断（原则为“横平，竖直”）。当PE探测器检测到的FITC信号恰好完全消除时，即PE信号与阴性对照一样时，PE对FITC的补偿调节完成。（3）PE单染管：同理，将进入FITC探测器的PE信号通过补偿调节来消除。 （4）当设置好以上补偿条件后，即补偿调节完毕。