生如夏花zzh
排出一下是否有大量死细胞。重复性实验。
bamboopiggy
降低一下你的抗体浓度试试,或者做好阴性对照,gating出去那些非特异染色
秋秋欣欣
非特异性染色一般来源有以下几点:
1.抗体的特异性不好,结合了其他抗原
2.抗体结合了特异性的Fc端受体,而不是通过Fab端结合
3.抗体通过蛋白质直接的粘附作用结合在细胞上
4.死细胞细胞膜破损后抗体被聚集在死细胞内部
5.细胞内大分子产生的自发荧光
建议采用以下措施来减少非特异染色:
1.每个抗体使用前都需要做最佳工作浓度的测定
2.使用Fc端封闭,BSA封闭
3.做死细胞染色,分析时排除死细胞
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