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我做流式的时候,总是有非特异性染色,该如何避免

相关实验:药物对动物腹腔巨噬细胞的影响实验

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Eason老歌迷

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3 个回答

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生如夏花zzh

有帮助

排出一下是否有大量死细胞。重复性实验。

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bamboopiggy

有帮助

降低一下你的抗体浓度试试,或者做好阴性对照,gating出去那些非特异染色

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秋秋欣欣

有帮助

非特异性染色一般来源有以下几点:

1.抗体的特异性不好,结合了其他抗原

2.抗体结合了特异性的Fc端受体,而不是通过Fab端结合

3.抗体通过蛋白质直接的粘附作用结合在细胞上

4.死细胞细胞膜破损后抗体被聚集在死细胞内部

5.细胞内大分子产生的自发荧光

建议采用以下措施来减少非特异染色:

1.每个抗体使用前都需要做最佳工作浓度的测定

2.使用Fc端封闭,BSA封闭

3.做死细胞染色,分析时排除死细胞

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