努力搬砖建设梦想
前面说的都很全面,我补充一点,是我老师说过的,就是在固定包埋的时候要做好。有时候固定没做好,后面切片染色的时候就很容易脱片。用防脱片都不太行
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1)如果是烤片时间不够,或温度不够,可以延长烤片时间和提高烤片温度;
2)可以改用用含有多聚赖氨酸的玻片;
3)有些组织本身就容易掉片,如骨组织等,操作时冲PBS不要直接冲到组织上,冲到组织上方,让它流下冲洗组织;
4)用高温修复时,注意避免温度骤冷
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烤片子很重要,切好的片子先不要马上收起来,而是水平至于烘片台上37度两个小时以上,一是水分彻底烘干。然后做染色前再在60度烘箱烘1个小时。
再补充一点 ,石蜡包埋时,酒精梯度脱水以及浸蜡等一点要充分,这对贴片也有影响。
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一般用APES:丙酮=1:50的处理液来处理片子,处理5min左右,然后水洗,烘干既可用于贴片。如果把水滴再处理好的片子上,水比较聚的话说明片子处理的好。
贴片子的时候,展片的时间要把握好,不要太长,否则不利于贴牢。
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用多聚赖氨酸处理一些玻片,注意切片的厚度。