ASC寡聚化求助

在不剪膜的情况下，ASC蛋白二聚体的分子量约为44 kDa，与常规的SDS-PAGE电泳分离条件下的分子量范围有所重叠。因此，建议使用较高浓度的聚丙烯酰胺和较长的电泳时间，以充分分离二聚体和单体的ASC蛋白。同时，建议使用Western blot方法进行检测，以提高检测灵敏度和特异性。

可以考虑使用独立的胶进行迁移，或者将二聚体和单体在膜上的位置区分开来，例如将二聚体和单体在膜上分别迁移到不同的区域，或者使用Western blot检测时，用不同的抗体对二聚体和单体进行检测。

如果您想在同一张膜上检测二聚体和ASC蛋白，以下是一种常用的方法：

1. 样品准备：将细胞或组织裂解，并提取总蛋白。根据需要，您可以预先处理样品以促使二聚体形成。

2. SDS-PAGE准备：准备一张适合您所需蛋白分子量范围的聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE gel）。您可以使用预铸凝胶或自制凝胶。

3. 样品加载：准备您的样品，添加适当的样品缓冲液并加入还原剂（例如DTT）。将样品加热至95°C，然后快速冷却至室温。

4. SDS-PAGE电泳：将样品加载到凝胶孔中，并进行电泳。请确保您使用适当的电泳缓冲液，并根据蛋白的分子量和您的实验要求设置适当的电泳时间和电流。

5. 转移到膜上：将分离的蛋白从凝胶转移到膜上，可以使用半湿式或干式转移系统。根据蛋白的大小和您的实验要求，选择合适的转移条件。

6. 免疫印迹：进行免疫印迹实验，使用适当的抗体探测二聚体和ASC蛋白。您可以选择使用两个不同的一抗和二抗，标记不同的荧光染料或酶来检测这两个蛋白。

7. 成像和分析：根据您所使用的检测方法，进行成像和蛋白定量分析。根据实验要求，您可以选择使用荧光成像系统或化学发光系统。