细胞免疫荧光用 4% 多聚甲醛固定，1% BSA 封闭，这两步可以不要吗？省去会有什么影响？

“加荧光标记抗鼠抗体（第二抗体）工作液20ul，混匀振荡置4℃/30分钟（时间不能超过）。”请问这步必须是4℃/30分钟吗？时间不能超过，如果超过了会有什么影响？” 二抗不一定就是4℃ 30分钟，我们经常采用室温下避光孵育1小时，这样也可以得到较好的效果。 细胞免疫荧光是需要固定的，根据目的蛋白的不同可以选择多聚甲醛或者丙酮，一般固定20分钟。 封闭也是需要的 可以减少非特异性背景。