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科研学霸天团，48小时有问必答

问双向免疫扩散实验结果问题

郭郭的郭郭

根据抗原的成份可有以下三种现象：（1）若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉，也就是沉淀线弧支线；（3）若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。

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问用51cr铬酸钠标记靶细胞

dxywode

首先用培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞，置37℃水浴30分钟，以减少非特异的自然释放。离心200×g 10分钟，去上清液。

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问免疫电泳检测粪内贾第虫抗原诊断问题

郭郭的郭郭

免疫诊断为辅助诊断，主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体试验（IFA）和对流免疫电泳（CIE）等方法，其中ELISA简单易行，检出率高（92%～98.7%）等特点，适用于流行病学的调查。CIE可达94%，均可诊断粪内贾第虫。

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问目前有哪些成熟的技术已经应用的有哪些这些应用会人类带来哪些变化整体的发展方向是什么这其中有什么样的个人发展机会

郭郭的郭郭

机器人手术革新，机器人手术用于微创手术，有助于提高精确度，控制力和灵活性。在手术机器人帮助下，外科医生可以执行非常复杂的手术，否则这些手术非常困难或不可能执行。随着技术的改进，它可以与增强现实相结合，以允许外科医生在操作的同时实时查看患者的其他重要信息。虽然手术机器人的发明引起了人们对机器人最终将取代人类外科医生的担忧，但它很可能仅用于协助和增强外科医生的工作。

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问常用的去除内源性酶的方法是3%过氧化氢水溶液。但在含有丰富血细胞的标本中，会有气泡现象，是否有可替代去除方法呢？

郭郭的郭郭

如果采用过氧化物酶的检测系统，必须进行内源性过氧化物酶封闭处理。代替过氧化氢水溶液，加还原性物质比较好，硫代硫酸钠、亚硫酸钠、保险粉之类的。方便搞到酶的话，酶也是不错的。另外，你最好说一下水里还有什么产物，看一下对这些东西对你的产物有没有影响。降温，加入亚硫酸钠水溶液洗涤就好了，双氧水在高温情况下，对你产品看否有影响的。如果有，那就改方法，萃取出来，分相，再去亚硫酸钠洗涤的。

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问最多能用几种抗体去筛选t细胞？

颜渊溪桥

我觉得主要看实验目的。胸腺中的不同时期t细胞及亚型可以用cd4，cd8，，cd25等筛选。次级淋巴器官及其他组织中可用cd3画总的t, cd4-cd8等往下画，然后再根据你所需要的亚型表征去泡，比如终末耗竭 pd1+ tim3+，只要流式通道允许，没有固定限制。

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问电泳液PH没问题，电极也没插反，为什么跑不出条带？

郭郭的郭郭

这个有许多原因，跑电泳有对照吗？比如marker.如果没有就是电泳问题，如果有，你看下有没有引物二聚体，如果没有，pcr整体肯定忘加东西了，需重做，如果有，就是你pcr体系本身有问题，需要优化，或是你的引物不好，需重新设计。还有就是琼脂糖里面忘记加溴化乙锭了，这个也有可能。

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问正常人的血清免疫电泳结果：免疫球蛋白（Ig）处于阴极端，离加样孔由近及远依次顺序是什么？

郭郭的郭郭

IgM离阴极端最近，然后是IgA，最后是IgG。

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问染色细胞核不清晰是什么原因呢？

师医生说

在免疫组化染色中多使用HE染色中经常出现有细胞核的染色不清晰，1，首先要考虑是否有固定不及时及固定不完全的情况，2，细胞核着色主要是苏木素，其主要的作用要看下是否有苏木素存在结晶以及环境温度过低，3，有使用过久的苏木素染液。4，无水乙醇以及透明剂没有很好的把握时间

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问免疫荧光背景太强怎么解决

Kimser

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

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问石蜡切片如何保持固定

师医生说

病理组织切片必须经过固定才能保证后续一系列的制作过程组织标本要在24小时内尽早的固定，最好是立即固定，越快越好，另外，固定液的选择要使用10%的中性缓冲福尔马林液。固定液的量必须大于标本体积的4倍以上固定的温度要保证，至少在24摄氏度及以上的环境中操作。在操作过程中，要保证酒精脱水和进水的浓度

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问影响淋巴细胞转化的因素有哪些?

LLLLDL

⑴、受体细胞转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，它可容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。另外还应根据载体的性质及实验的目的选择合适的宿主。此外，受体细胞生长状态和密度也很重要。不要使用经过多次转接或储存于4℃的培养菌。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，密度过高或不足均会影响转化率。⑵、载体DNA和重组DNA方面载体本身性质决定了转化的

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问环状沉淀试验中，为何下层加特异性抗血清，上层加抗原？

小暮

从定义上看，因抗血清抗体浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。相应抗体只会与相应抗原结合，而先加抗原，抗原会与其他物质结合。这样充分特异性结合

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问对流免疫电流里，为什么抗原必须加在接电源阴极的孔呢？

郭郭的郭郭

跟在缓冲液中抗原抗体所带的电荷以及两者泳动的方向有关。在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负电荷，而且它分子又较大，所以泳动慢，受电渗作用的影响也大，往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时，反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷，分子又较小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳动速度减慢，但仍能向正极泳动。

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问白板显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色是什么原因？

师医生说

在整个反应过程中有操作步骤错误，同时要检查是否试剂在有效期内，另外，要看显色液的AB液是否没有保存在避光环境中有失效现象。同时，要观察洗板过程中是否有清洗中高浓度的清洗液而导致包被的底物浓度不够，也不排除有其他的洗板过程中的消毒液影响

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问本人做双向免疫扩散试验，鉴别人血白蛋白。扩散后能看到明显的白色条带，但用氨基黑染色半小时，洗脱24小时后，在加样孔四周仍是黑色一

bqejjh123

血白蛋白为健康人血浆提纯的蛋白制剂，根据蛋白质在酸性条件下加入沉淀剂－10%钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀的原理，快速鉴别方法只需样品1ml与10％钨酸钠溶液5ml和0.33mol/L硫酸溶液5ml置于试管中，观察试管中的絮状物（沉淀）即可，假冒的白蛋白一般无絮状物产生，说明其中根本没有蛋白质。按药典收载的免疫扩散试验，假冒产品均不与抗人的血清产生沉淀线，其鉴别结果不呈正结果。两者具有完全的一致性。

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问Elisa实验显示不明显问题

peaceful13

是所有孔显色都不明显？标曲如果也不显色，那应该是整个实验体系是有问题的，需要去深究一下原因，如果标曲显色是正常的，而样本显色比较低，一般就是样本含量的问题，如果确实是因为含量低的原因，那么需要优化一下样本的处理或者对样本蛋白进行提取过纯化

4 回答75 围观

问跳孔出现随机性的花板、跳孔现象是什么原因？

府宅

1.洗板机某几个加液头堵塞导致花板、跳孔。2.拍板时交叉污染。

3 回答79 围观

问在用流式分析TME中各种T淋巴细胞群的变化时，CD3这群细胞没办法从CD45中明显圈门出来，导致后面分析不够准确，请问有什么办法

Kimser

使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达

3 回答86 围观

问Elisa显色相关问题

小布丁瑶瑶

不同试剂盒的组分混用或替代；稀释后的工作液浓度较高，可能是稀释前未离心或者取液量不准确

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