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科研学霸天团，48小时有问必答

问免疫组化中，什么时候采用柠檬酸修复，什么时候采用EDTA修复？

dxy_gwrp7ndq

高温高压pH6.0柠檬酸盐缓冲液修复，适用于绝大多数抗原。需要用95℃热水浴EDTA（pH9.0）修复20分钟。适合于：CD10、CD138、Bcl-6、MuM1、VEGF、CD31、CD117、CD30、Cyclin D1、TdT、ALK。用柠檬酸修复后，切片需浸泡在修复液中，自然冷却；而用 EDTA 修复后，切片可直接从修复缸中取出，直接进行下一步。用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。

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问间接法酶联免疫反应中如何控制二抗浓度？

dxy_gwrp7ndq

可以分别加入1：2000，1：10000，1：50000 二抗，进行滴定

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问请问Elisa实验需要几个技术重复呢？

府宅

ELISA实验要重复三次，每个样本做两个复孔

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问免疫组化，切片出现断裂，是什么原因呢？

小布丁瑶瑶

透明时间过久容易导致断裂，可根据组织透明情况来使用二甲苯透明，另外试剂还是需要定期更换的

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问问:标本流水冲洗可以超过24h吗？

师医生说

标本的流水冲洗在染色步骤中至关重要，要尽可能的控制水压和注意评估流水的酸碱度，在保证，均匀的流出情况下，有很好的分化和反蓝作用，是可以适当延长时间的

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问流式连续表达怎么画门？

txs900416

一般会设置对照组，例如荧光减一组，isotype同型对照组，这样根据这种对照组区分阴性表达的上限，这样可区分连续表达分子的阴性和阳性。

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问请问使用辣根过氧化酶（HRP）标记时，是否在后续的封闭液不能加叠氮钠？

府宅

叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。

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问标本固定超过一个星期还有用吗？

府宅

标本放了一周能否使用，还与标本要做何种检查有关。若是做微生物学检查，活检标本放了一周则不能使用，因为微生物学检查需要保证活检标本的新鲜程度，放了一周的标本已经不够新鲜。如果是为了查病理或细胞学检查，不需要保证标本的新鲜程度，这时即使活检标本放了6天也能用。如果在取到标本当时及时进行了固定处理，这种标本可以较长时间的进行保存，保留一个月是仍然可以用的。否则，组织细胞会很快发生溶解破坏，长时间的放置

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问请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀？

dxy_gwrp7ndq

细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测，采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体，或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体，另一个抗体标记酶，作为检测抗体。

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问小鼠肝细胞PCR怎么测？

彭文彬

可取米粒大小肝脏，提rnd逆转录！

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问取器官标本前一定要放血吗？

txs900416

这取决于取标本的目的。例如标本需要提取损伤敏感的蛋白（DAMP）之类，放血可能造成damp的释放增加，此时不应放血，应迅速将样本置于液氮；又例如样本要包埋切片进行染免疫荧光等染色，此时红细胞的染色背景可能会影响实验结果，最好是放血。

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问肝脏油红O的染色步骤

府宅

1. 油红O染色液的配制油红O染色液分储备液和工作液。①油红O储备液的配方：100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉，充分溶解，过滤，4度避光保存。②油红O工作液的配方：实验前，将储备液与蒸馏水按3:2稀释，过滤（滤纸或极性滤膜配1mL注射器），酒红色且无沉淀。现配现用原则，避免工作液出现沉淀。2. 60%异丙醇的配制60%异丙醇的配方：100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL，4度保存

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问western blot 转膜及条带问题

dxy_gwrp7ndq

1.洗膜不充分，增加洗涤液的体积和洗涤次数；在洗涤液中加入Tween=20。2.二抗浓度过高，引起了一些非专一性的抗原-抗体相互作用，适当降低二抗浓度，可以分梯度进行。3.二抗的识别抗原免疫簇不唯一，这是因为二抗是多克隆抗体，使用单克隆抗体的二抗，此时二抗的识别抗原免疫簇是唯一的，其非专一性的抗原-抗体相互作用会大为减少。当然，有时，单克隆抗体也会有识别抗原免疫簇不唯一，如果两种蛋白质的抗原免疫簇

3 回答124 围观

问怎么避免抗癌药物对自身造成伤害？

府宅

严格控制抗癌药的用量，可以预防性使用保护性药物，如护肝、护肾的药物

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问免疫组化染色为什么有杂点？

府宅

组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。

3 回答106 围观

问染色最重要的操作步骤是哪个

bigred大红

样本前期处理和敷抗体都是关键步骤。

4 回答107 围观

问如何减少免疫组化的非特异性染色

府宅

(1)可以选择购买高质量、高纯度的荧光素二抗。（2)延长血清封闭时间。(3)调整一抗和二抗孵育条件和浓度至。(4)一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次数和延长清洗时间。

3 回答107 围观

问免疫组化实验中购买的抗体试剂建议浓度在预实验中效果不好，如何调整浓度能节省抗体和实验周期

dxy_gwrp7ndq

为调整到最佳浓度，可进行预实验，通过滴定测试确定适合自身应用的最佳抗体工作浓度

2 回答137 围观

问即用型免疫组化怎么具体操作

泌尿神兽

1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置 60 分钟或 60℃恒温箱中烘烤 20 分钟。 a 组织芯片置于二甲苯中浸泡 10 分钟,更换二甲苯后在浸泡 10 分钟 b 无水乙醇中浸泡五分钟 c 95%乙醇中浸泡五分钟 d 75%乙醇中浸泡五分钟 2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片： A 抗原热修复 a 高压热修复在沸水中加入 0.01m 枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上

3 回答110 围观

问做小鼠脾脏的胞内因子分析时，应该用什么刺激阻断剂，适合与IL-6和IL-1β的检测？

府宅

可通过收获3天巯基乙酸盐诱发的腹膜细胞，并用1μg/ ml LPS和GolgiPlugTM刺激4小时

2 回答140 围观

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