实验问答4,314,003 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问做间接法荧光免疫染色，如何设置对照？

府宅

(1)空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。(2)阴性对照：标本直接滴加二抗，呈阴性反应。(3)抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

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问为什么预选实验跟实际有差距

迟C迟

这个同学，你首先得了解预实验，预实验不等于正式实验，一切结果以正式实验为准。如果实验不可重复，除了考虑操作原因，可能也得考虑课题设计初衷。

7 回答156 围观

问请问细胞固定时需要注意什么？

迟C迟

1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。2、多聚甲醛虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。

3 回答374 围观

问免疫组化标本保存用生理盐水还是甲醛?

迟C迟

甲醛和生理盐水都可以。如必须保存时，则应保持置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。

3 回答121 围观

问EMSA反应后条带弥散

whilt-shirt

检查探针上是不是有很多蛋白的BINDING SITE ？尝试减少曝光时间，EMSA 要在正常实验前要试一下不同BUFFER，高盐低盐等对结果的影响，建议从头摸索一下实验条件。另外考虑是不是跟胶聚合有关系。配胶的试剂是否新鲜，聚合是否充分。核酸电泳的时候，胶不好跑出来有时就会拖拖拉拉的。

3 回答793 围观

问蛋白浓度较低，如何提高上样量

whilt-shirt

选用10孔的梳子，增加上样体积，提高总蛋白量

5 回答149 围观

问大分子量蛋白（470kDa）如何快速转膜？

staywalking

Tris- Acetate gel电泳，低浓度甲醇冰水浴湿转。欲速则不达。

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问免疫组化两步法和三步法有什么优缺点呀？

dxy_gwrp7ndq

三步法是一般是最常用的免疫组化方法，敏感度高高的，操作上面也十分简便。如果组织内源性生物素过高，就容易造成了假阳性显色。内源性生物素在肝，肾组织中的含量尤其多，在脾、胰、脑、乳腺、子宫内膜和骨骼肌等组织中也广泛存在，因此，避开内源性生物素的感染，才最为关键。二步法利用多聚HRP代替了Bioten，这一招移花接木，从技术上克服了组织内源性生物素造成的非特异性的背景染色。二步法在避免了生物素干扰的同时

4 回答344 围观

问培养已经有耐药性的金黄色葡萄球菌时，有必要添加抗生素来保持其耐药性吗？添加抗生素的时间、添加在哪里在什么时候比较合适呢？

彭彭彭文

当然必须使用，在培养时，加入实验中培养基

4 回答202 围观

问耐药细菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌在培养过程中，是在那一步加入抗生素来保证细菌的耐药性的呢？是在保存液中加入还是液体培养基中？

迟C迟

细胞培养时就要在培养基中加入抗生素了。保存的时候可以直接吸取含抗生素的培养液加甘油保存。

3 回答169 围观

问为什么冰冻切片不可以用甲醛固定

dxy_gwrp7ndq

如果用多聚甲醛或者是甲醛进行固定的话，组织速冻的过程中会产生冰晶，不利于组织的切片，并且影响片子的质量

3 回答245 围观

问提取DNA前处理有磁珠，一般会是哪里的原因？

丁香粉猪猪

可能跟磁珠的词性跟或者磁吸的时间有关

4 回答135 围观

问预实验和正式实验结果差别很大

迟C迟

考虑两次实验有什么样品、操作、实验试剂差异。控制环境变量之后，建议提高样本量重新做，没办法，做实验就这样。

3 回答214 围观

问免疫荧光为什么单标红色出来的是粉红色

丁香粉猪猪

标本固体色调制不对，可能显微镜或者固体液不对，调试一下

4 回答129 围观

问ELISA实验如何尽量避免假阴性和假阳性？

dxy_gwrp7ndq

引起 ELISA 测定错误结果的原因主要有：①标本因素（类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等干扰）②试剂因素（标本管中添加物质的影响）③操作因素（标本溶血、标本受细菌污染、标本凝集不全、标本保存不当）

4 回答260 围观

问如何提高标记准确率？

迟C迟

请问是什么实验？在医学研究领域，生物标志物的研究思路，一般分为三个阶段：标志物的筛选（Discovery）,标志物的验证（Verification）和标志物的确认（Validation）。标志物的筛选通常需要借助高通量的组学手段，对大规模临床样本进行代谢组学或蛋白组学测定，筛选到具有统计学意义的差异代谢物或蛋白，经过一系列复杂的生物信息学分析，筛选出目标生物标志物。接下来的验证阶段，需要对更小范围

3 回答111 围观

问亚硫酸盐修饰过得DNA，回收率总是很低，怎么优化呢？

迟C迟

如果你不想把时间花在摸索上面，用试剂盒转化纯化是个选择。一般用DNA重亚硫酸盐转化纯化试剂盒，可以搜一下，跟着Protocal做，DNA样品未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率可高达99%。

3 回答179 围观

问石蜡包埋组织可以提取RNA吗？怎么提取呢？

dxywode

可以。1. 自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。作者：清风拂面vv链接：https://

3 回答241 围观

问结果背景颜色过深是因为什么原因呢？哪些步骤需要注意呢？

菲菲飞呀飞

1）考虑一抗浓度高；2）然后调整DAB孵育时间；3）也要考虑血清封闭时间是否过短；4）适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

3 回答65 围观

问出现干片的情况还可以复原吗？有什么方法补救？在实验过程中哪些步骤容易导致干片？

dxyv9281

组织过于干燥会出现干片，可以延长浸泡次数和时间

2 回答85 围观

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