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科研学霸天团，48小时有问必答
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通透是否会影响细胞膜表面蛋白染色？
whilt-shirt
会有点影响，有可能会导致膜蛋白染色效果变差
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问
想要看肺癌组织中浸润CD8+T细胞是否表达TCN1这个蛋白，请问免疫荧光怎么做，求具体方法？
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问
求助贴子
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问
痰标本处理疑惑
Eason老歌迷
以下为定值的判断条件:一个合格的痰标本，应该满足白细胞大于25，上皮细胞小于10，得出的结果才有意义。
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免疫组化
秋秋欣欣
二抗干了的话就有影响如果只是短暂没干就没有影响
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问
BD流式软件与Flowjo
Eason老歌迷
是不是没设置好，我感觉好像是初始化了，没调试好
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问
qPCR的CT值标准
bamboopiggy
正常值范围是20-35吧，如果实在不行，预实验可以设置两个复孔，复孔间差值不要超过0.5
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问
是染噬菌体了嘛
天一湖医者
那应该是细胞碎片，或者菌碳化了，很正常的，可以进行清洗。
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问
求助菌液浓度测完做标曲，如何判断公式能不能用
dxy_c1z3mp3
R2要接近1才行，你算出来R2太小是因为稀释倍数不够，多做几个点，找到R2最接近1的那一段才能当标准曲线
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问
粪菌移植测定菌量
balalaLy
文献中比较普遍的方法是涂培养板到第二天计算菌落数量
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问
jurkat 免疫抑制
天一湖医者
可以用jurkat细胞进行体外免疫抑制模型，刺激时间 6h，按时间梯度取样，以 Caspase 3 抗体检测
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问
抑菌率实验求助
麻黄连翘赤小豆
第一个问题回答不确定，做细胞基本都过筛或者灭活一下，做细菌的应该也要吧第二个问题回答一般血清做炎性因子我们都是直接取出来离心后进行Elisa ，不知道你是不是做这个的
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问
免疫荧光一定要用共聚焦显微镜看吗？
秋秋欣欣
普通荧光显微镜也是可以看的啊。
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问
免疫荧光双染抗体选择
Eason老歌迷
应该是没问题的。选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的。
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问
ChIP-nexus和ChIP-exo和普通的ChIP有什么不一样？
bamboopiggy
CHIP-nexus 是能够在基因组中精确定位转录因子结合位点的新技术，该技术分辨率很高。CHIP-exo（ChIP外切酶），应用于各种蛋白因子结合在基因组上结合位置的鉴定，以达到碱基对水平的分辨率。c
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问
如何选择合适的elispot试剂盒，要做疫苗抗体效价检测
天一湖医者
1、查找待测样本的蛋白浓度 可以通过NCBI的文献，给出的蛋白表达量参考值来比较elisa试剂盒给出的样本值与报道值是否一致。2、试剂盒的应用种属、检测样本的种类 除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用。3、•.检测范围： •建立线性范围：需测定9-11个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4
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问
在做流式时，如何解决非特异性染色的问题？
秋秋欣欣
降低抗体浓度可以减少非特异性染色
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问
PCR是在体外提供模板，高温变性，低温退火，室温延伸后才开始进行DNA片段的扩增的嘛
秋秋欣欣
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
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问
RNAi载体构建
Eason老歌迷
RNAi载体设计与构建中设计过程如下：有研究以pCDNA3.1(+)载体为基本骨架,在其转录单元的5’端添加了一个自剪切的HDV核酶用于切掉转录后的5’帽子和其基因编码序列的3’端添加了一个自剪切的烟草环斑病毒发夹状核酶用于将3’polyA切掉,又在发夹状核酶下游添加了一个加尾信号BGHpA(牛生长激素加尾信号)。为了更加保险的防止通读现象的发生在BGHpA加尾信号下游添加了一个自我剪切的烟草环斑
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问
jurkat
毕业不头秃
一般好像就用PMA+ionomycin去活化，或者再加Brefelding A让细胞因子在胞内聚集方便检测。
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