实验问答4,387,583 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问求问一下大佬，养的293t不贴壁是为啥

dxyc42u

培养皿不合适、培养基不合适（比如没有血清，或者血清错误）等，都可能出现这种情况。

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问免疫荧光固定的问题？

Eason老歌迷

如果干了，是需要补加的，因为步骤就是把它放冷丙酮里固定10分钟。

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问求助免疫荧光抗体问题？

bamboopiggy

只能说理论上是可以做的，但是建议你先做个预实验看看。每个抗体有每个抗体的特性，看预实验结果吧。

3 回答60 围观

问wb目的蛋白不好曝，必须用超灵敏的发光液才能曝出来怎么办

bamboopiggy

1.超灵敏的发光液能曝光出来就可以啊。2.增加一抗和二抗的浓度。3，增加蛋白浓度

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问做荧光补偿和电压调节有什么需要注意的地方吗？

小小小小小芳

调节补偿时，一定要先调节好电压参数，才能调节补偿，补偿调节完成后，电压参数不能改变，若是免调电压的仪器则不必这样

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问小鼠脾脏、淋巴结和全血在液氮冷冻，-80冻存后还可以做流式吗？

丁香一方

可以做，冷冻需要加保护剂。切解冻迅速。避免细胞液出现冰晶，刺破细胞！

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问在流式实验中如何确定低表达分子的阴阳细胞群

你好几和户

不清楚抗原表达情况的时候，一定要使用同型对照来界定阴性细胞群。

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问AM/PI活死细胞染色红绿荧光重叠问题

dxy_gcvb0ilr

甲醛固定不是就把细胞杀死了吗？肯定染出来是红色吧？

5 回答3187 围观

问请问DAP（二氨基庚二酸）缺陷型菌株保菌过程有大佬赐教嘛？

Eason老歌迷

3 回答83 围观

问求助，Hif1a的ChIP

天雨心晴

缺氧箱也可以，只要能诱导出低氧应答就行。

3 回答136 围观

问小胶质细胞标志物的免疫荧光染色染不出来怎末改进？

Injector2016

Iba1很容易染出来的，不会是二抗有问题吧，或者成像设置有问题？

5 回答122 围观

问免疫荧光定抗体GABA

小小小小小芳

可以、细胞免疫荧光想染GABA，买抗体买Anti-ABAT/GABA-T是可以的哟

3 回答90 围观

问有人用间接竞争法做过化学发光酶免疫分析吗?

李胜强_mr3x

最主要的是要清洗干净，每一步都做好冲洗，才能保证结果的正确性！

3 回答84 围观

问去除刺激源后的m2巨噬细胞稳定吗

小小小小小芳

可以参考文献1. JoVE. June 2013 2. Sci Rep. 2020THP-1细胞向M1，M2的极化

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问组织放多久还可以做流式

WolfgangX7YL

要分活细胞的话最好立马做吧，冻了-20或者-80或者液氮都影响蛮大的，原则就是尽快做，在做之前都放在4度

5 回答103 围观

问求助：包装腺相关病毒

Marchers

不是必须的，可以用HEK293；先是用常规的方法培养HEK293细胞，传代后24 h后，用购买的Lpotectamin 2000协助重构的质pAAV—MCS及AAV HelpeFreesystem中的其他两种辅助质粒pAAV—RC及pHelper共转染HEK293细胞，培养72 h后，用X—gal染色系统检测质粒转染的效果。用物理方法破碎细胞后，提取病毒悬液，用分光光度仪检测260nm的A值来评价

3 回答158 围观

问跪求幽门螺杆菌SS1菌株及培养技巧

Marchers

1. 先将适应菌株SS1和初始菌株10700菌株接种于含50mL/L绵羊全血的哥伦比亚琼脂平板上, 平板中含有两性霉素B 200 mg/L、多黏菌素B 200 mg/L、万古霉素250 mg/L、TMP 300 mg/L. 2. 平板置于50 mL/L O2, 100 mL/L CO2, 850 mL/L N2的微需氧气体环境中37℃培养48 h后3. 取出平板后刮取菌苔, 用8.5g/L的NaC

3 回答146 围观

问死活染颜色的固定了之后可以保存多久

小小小小小芳

如果不能及时上机检测，可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min，清洗细胞，之后用适量的Stain Buffer重悬细胞，4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。前面已经做过类似固定步骤（例如固定破膜）的细胞如果能确保24h内上机，实际上无需再次固定。如不能，推荐再次固定以稳定胞内抗体的结合。

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问LDH释放实验中的HLA分子抑制剂选择

你好几和户

可以选下面这些的Sodium oxamate，AZ-33，GSK 2837808A

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问做免疫荧光一抗是标签抗体，非特异性太多怎么办

冷泉港蛋白

1.如果用的是His标签抗体，特异性是比较差的，想调整的话，难度比较大，抗体本身特异性不好。因为是undefinedhis。undefinedhis、undefinedhis可能都会反应。2.如果用的是Flag标签抗体，挺好用的。可以调整下浓度和洗脱液。如果不行，换个进口抗体试试。

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