求助 提PBMC的红细胞裂解法

加入3~5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。加入1倍血液体积的红细胞裂解液重悬沉淀，500g离心3分钟，弃上清

红细胞裂解法（可选以下2种方式）

① 样品染色后溶解红细胞

1. 取肝素或EDTA抗凝外周血100μl每份，放置1.5mL离心管中，加入荧光抗体1-2μl（按抗体说明书），人的样本室温避光15-30min，小鼠的样本4℃进行染色；
2. 加入3倍体积的红细胞裂解液，混匀，避光孵育1-5min；
3. 离心800g，2min，弃上清；
4. 1mL PBS重悬洗1-2次，离心800g，2min，弃上清；
5. 上样Buffer300-500μL重悬，300目细胞滤网过滤，准备上机分析。

② 样品裂解红细胞后染色

1. 在100-200μL抗凝全血中加入3倍体积的红细胞裂解液轻轻混匀；
2. 室温或冰上静止5-10min，其间轻混匀1-2次；
3. 红细胞裂解后，溶液清澈透明；
4. 离心800g，2min弃上清，收集细胞；
5. 1mLPBS重悬洗样品1次；
6. Buffer300-500μL重悬，300目细胞滤网过滤，准备上机分析。

1. 每管加入100ul抗凝全血；
2. 每管加入2ml红裂液，立即轻柔混匀，室温避光孵15min；
3. 1500rpm离心5min 4℃，弃上清；
4. 2ml流式Buffer洗两遍，350g离心5min，弃上清；
5. 加入表面抗体（IgM-PE 2ul/100ul体系），避光孵育20min；
6. 300ul流式Buffer重悬细胞。
7. 检测后分析 (见下图)。