dxy_xjvu2vl2
求助,最近在做酒精肝课题的细胞实验,,卡在转染小RNA这一步了,用的是AML12细胞,做了几次酒精都刺激不起来。
做四个分组:cotrol+阴性对照,EtOH+阴性对照,control+siRNA,EROH+siRNA,
问题就出在做了几次,乙醇刺激不起来,ETOH组目的基因并不升高,想问下这和转染与乙醇刺激的先后顺序有关吗?
我是这样做的,提前一天种板→24小时后转染,转染第二步换液后用正常培养基加乙醇刺激(已经做过预实验,试验过普通培养下最佳乙醇浓度与时间)→48小时后提取RNA和蛋白质。
难道是要改成先乙醇刺激48小时再转染吗,求回答
loveliufudan
在你的实验中,转染与乙醇刺激的先后顺序可能会影响结果。由于你是先转染再加入乙醇刺激,可能导致细胞在受到乙醇刺激前就已经开始进行基因表达的调控。因此,建议你在先乙醇刺激一段时间后再进行SiRNA转染。
具体而言,你可以先将细胞培养到一定密度后,加入预先测定好的最佳乙醇浓度并继续培养48小时,然后再进行SiRNA转染。转染后继续培养48小时,最后提取RNA和蛋白质进行检测。
此外,建议你在实验设计中加入一些对照组,例如只进行乙醇刺激或只进行SiRNA转染,以更准确地评估实验结果。
balalaLy
应该是先转染再乙醇刺激,先验证一下转染效率,转染后24-48h收RNA
毛利小五郎的徒弟
乙醇的浓度多少,可以考虑提升乙醇的浓度。