求助 |给细胞转染了miR mimic，目标蛋白反而升高了。

AlanNeko

2022-12-14

给细胞转染了miR mimic，我们用的mimic是合成的单链RNA，序列即为miRNA的成熟序列。TargetScan预测结合位点在3UTR。

PCR确认转染成功，但是目标mRNA无显著变化。WB显示目标蛋白的表达量反而升高了。

试过用更高浓度的mimic（x100）转染，情况同上，几乎没有变化。试剂为Lipofectamine RNAiMAX，24小时和48小时转染都试过，无显著差异。

求助各位老师，这种情况可能是什么原因？应该如何改进实验？谢谢！

yqyq28

2023-08-08

有帮助

你好！请问解决了吗，我也遇到了这种情况！！

毛利小五郎的徒弟

2022-12-15

有帮助

可能是你的反应体系中有目标蛋白污染了。

Dr_劉医生

2022-12-14

有帮助

按你的描述，转染成功了但目标mRNA无显著变化，是否检测一下mRNA的翻译蛋白功能是否正常呢？WB显示目标蛋白的表达量高不一定就是mRNA翻译后的蛋白量就高，可能是WB跑的时候有杂质或者其他因素，首先得确定是细胞mRNA翻译的问题还是WB的问题，我觉得是前者。

AlanNeko

2022-12-16

谢谢老师回答，请问您指的是可以考虑检测mrna翻译效率或是检测正在翻译的mrna吗？用蔗糖梯度离心之类的实验？谢谢老师。