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木木CJEB
最近取了小鼠脑组织,想做冠状切片,有没有大佬可以指点一下脱水,透明,浸蜡的条件,非常感谢,还挺急的,孩子想毕业
丁香一方
固定,取材当天即把所需包埋的组织取出后放入4%的多聚甲醛中(12h);
冲水,12小时(注意水流不需要太大,不可将水流直接冲击组织)
脱水,60%酒精 4h(或者 60%酒精 4℃12h)→70%酒精 4h→80%酒精 4h→90%酒精 4h→95%酒精4℃12小时→100%酒精Ⅰ2h→100%酒精Ⅱ 2h→100%酒精III 2h
透明,二甲苯Ⅰ5+3 min→二甲苯Ⅱ5+3 min→二甲苯Ⅲ5+3 min→二甲苯IV 3+2 min(浸完后拿出脑组织观察一下透明情况,一般通体琥珀状,若是脑组织内部白色不通透,酌情延长透明浸泡时间)
浸蜡,软蜡Ⅰ2h→软蜡Ⅱ2h→软蜡Ⅲ2h→中蜡包理
软蜡:熔点48-50℃的石蜡,中蜡:熔点 58—60℃的石蜡
蜡完全融好后,冷却至烧杯上沿不是太烫手且蜡也未凝固,将蜡于60℃温箱里备用。
包埋组织注意蜡温。
待切的面朝向包埋铁框面。
包埋时勿将气泡带入。可以稍微倾斜一些放置塑料包埋框。
酒精串缸结束,可取出部分组织评估,以防影响透明
酒精串缸结束后,把包埋盒用滤纸尽量弄干,然后再往二甲苯中放。
5蜡块包埋完成,待蜡块凝固放于一20℃冰箱里10min,以利于将铁框和包埋盒分离。
balalaLy
急的话建议取了组织交给病理科或者公司做,毕竟石蜡片制作过程挺复杂的。
Eason老歌迷
脱水:组织经过50%、70%、85%、95%的梯度酒精各30min,无水乙醇两次,每次30min完成脱水。透明:分别经过无水乙醇:二甲苯、二甲苯(Ⅰ)(根据组织透明度,可减少或增加第二遍二甲苯透明的时间)、二甲苯(Ⅱ)各30min。浸蜡:蜡Ⅰ,蜡Ⅱ各30min。石蜡温度控制在58-62℃,高于熔点2℃为佳。
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