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WB曝光无条带请教,第一次有,第二次做无条带
毛利小五郎的徒弟
还是更换抗体的原因,同一实验最好不要更换抗体。
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问
ELISA检测稳定性实验如何设计?
毛利小五郎的徒弟
ELISA检测稳定性实验如何设计?(1)正式实验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件,待检样品应做一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 (2) 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括以下几点。①固相载体的选择。许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管
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问
高效液相色谱吸滤头使用有什么注意事项? 清洗需要用什么溶剂
huarenqiang5
高效液相色谱吸滤头使用有什么注意事项:1、使用流速一般为1.0ml/min,最高不超过3.0ml/min(制备),压力一般不超过25MPa,最高不超过30MPa。2、使用温度一般不高于50℃,最高不高于60℃(特殊要求的除外)。3、试剂瓶上应注明试剂名称,配制人员以及配制日期,同时写好仪器使用记录。4、开机后,先用色谱乙腈或甲醇(使用前要超声,脱气)冲洗约30分钟,流动相中若含磷酸盐缓冲液,用5%
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问
WB 条带跑成了球形
huarenqiang5
你这个主要考虑胶或电泳槽老化导致。
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问
求助,为啥这His标签蛋白纯化杂带这么顽强呢!
huarenqiang5
主要考虑以下几点:1、洗脱条件太温和。2、蛋白在柱子中沉淀。3、非特异性的疏水或者其他作用。4、蛋白和柱子接触时间过长。
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问
求助:有药物偶联蛋白的大佬吗
balalaLy
一般不溶于水的药物都需要借助吐温和PEG等助溶剂
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问
用刺激物刺激细胞看某个蛋白表达量的时候,设计了对照组0h,1h,2h刺激,对照组细胞什么时候提蛋白?
bamboopiggy
按照你刺激的时间收啊,刺激0h的,就0h收,1h的1h收,2h的2h收。ctrl的,0h收就好。
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问
小白求助,请问size exclusion chromatography结果图怎么看呢
bamboopiggy
这个结果图是洗脱后的wb图,你可以看洗脱的时间和蛋白的大小
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问
酵母双杂
huarenqiang5
因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长。
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问
求助,人精子蛋白的wb
申东熙老伯
可以试试增大蛋白上样量,转膜的时候降低电流,25算小条带,很容易转过。
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问
50毫升的制胶的29比1里边混了个3毫升水 不小心加错了 请问这个29比1还能用吗?
毛利小五郎的徒弟
胶的浓度偏低,但是胶的最佳浓度是一个范围,所以可以用
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问
活性氧数据分析
毛利小五郎的徒弟
①散点图(Dot Plot)可以简单的理解为细胞多的地方,点就密集一些,细胞少的地方,看着就松散一些散点图设置这里有一个空格,可以手动调整当前散点图中显示的细胞数量 ②密度图(Density Plot)他是表现与数据值对应的边界或域对象的一种理论图形表示方法,以整个细胞的分布密度,形成这种雾蒙蒙的图。
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问
为什么蛋白杂到两条带??
毛利小五郎的徒弟
我觉得最合理的解释就是同时存在两种蛋白,也就是说有混杂因素。
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问
wb 显影
申东熙老伯
你这个显影显得,条带和marker一样了 你的二抗是不是有问题了。
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问
跑WB时,marker弥散变粗变淡是为什么啊?
申东熙老伯
电泳了多久,是恒压吗?电泳液是不是漏了。
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问
WB剪膜
申东熙老伯
膜上下是有两张纸包着的,那两张纸不要丢,夹着膜来剪。
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问
WB转膜的时候marker转不上去
申东熙老伯
对,越大的条带越难转,可以试着加大电压延长时间。
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问
WB图像
huarenqiang5
主要考虑:1、b-actin或者一抗抗体有降解的情况。 2、可能是上样缓冲液的原因,缓冲液中还原剂有问题,造成了部分二聚体的出现。
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问
WB条带很淡几乎没有是什么情况
NatureBios
蛋白都连在一起了,我们可以将上样量降低一些,胶的凝固时间延长10min,让其完全凝固,上样时,可以用离心机离心一下,500r 30s
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问
wb条带位置在组织和细胞不一致,按照说明细胞是正确的,但是组织特异性很好,自动曝光的话条带就这一条,有没有哪位前辈知道原因?可否
huarenqiang5
你这个主要原因考虑是样品本身问题
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