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科研学霸天团，48小时有问必答

问已经确定诱导纯化出来的菌，隔段时间去纯化，洗脱后液体浓度降低，求大佬指导

loveliufudan

一.可能是由于以下几种原因：1.细菌繁殖过程中可能有细菌死亡或活性下降，导致细菌数量减少。2.细菌在培养过程中可能发生了某种程度的滴落，导致细菌数量减少。3.也可能是细菌在洗脱过程中被洗脱液吸收或洗脱不彻底导致。二.1.使用过的 GST 柱子可能会对其他蛋白的纯化产生影响。这个柱子以前没有纯出来东西的原因可能是因为没有选择合适的蛋白进行纯化，或者没有调整适当的条件（例如浓度，pH值）。2.使用过的

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问蛋白定量怎么提高准度?

李亚彪111

在不改变方法学的情况下，适当增加标准品浓度梯度，每个标准品测量数次求平均值，可以提高准确度

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问ELISA检测，浓缩链霉亲和素-HRP需要现配现用，稀释多了该如何保存？

李亚彪111

根据经验分装，零下20更低温度保存，

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问coip实验结果coip组两条带原因？

loveliufudan

可能是由于以下几种原因：1.A 蛋白和 B 蛋白之间存在多种相互作用方式，如直接相互作用、间接相互作用或通过第三方蛋白质进行相互作用。2.A 蛋白和 B 蛋白之间存在非特异性相互作用。3.在 A 蛋白和 B 蛋白之间存在负调控关系。4.A蛋白自身有多余的结合位点，导致自结合的情况5.在实验中，Co-IP的抗体杂质或者不纯的可能导致结果不准确。6.实验流程中可能有误差，如抗体结合不足，结合过多等。这

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问想问一下为什么做泛素化检测时都要转一个HA-Ub呀？

bamboopiggy

因为单纯泛素化的抗体不好做，用ha的抗体比较好检测

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问蛋白组学数据上传TCP端口问题

loveliufudan

1.确保数据格式符合ProteomeXchange平台的要求。你可以在ProteomeXchange官网上查看数据格式的要求。2.确保文件大小不超过限制。ProteomeXchange平台规定的文件大小限制可能会有所不同，这个也可以在官网上查看。3.检查网络连接是否正常，网络问题可能导致上传失败，确保你的网络稳定。

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问关于用甲醇固定的细胞如何洗脱下来测吸光度

loveliufudan

甲醇固定的细胞经过结晶紫染色后，如果需要洗脱下来进行吸光度测量，可以尝试使用以下方法：1.高温洗脱：将细胞在高温条件下洗脱，如使用70-90℃的热水或高温染色槽。2.使用酶解液：将细胞用蛋白酶液（如 trypsin）解液处理，使用酶解液可以分解细胞结晶紫染色。3.使用酸洗脱法：将细胞用酸性溶液（如 0.1-1 M HCl或 0.1-1 M H2SO4）洗脱，酸性溶液可以分解细胞结晶紫染色。建议在洗

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问WB的相关问题

huarenqiang5

内参也不是一定得用ß-actin，只是内参用它其效果比用其他内参效果好很多，之所以一般都用它。

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问WB实验曝光后背景脏以及一些黑点点可能是什么原因导致的？

loveliufudan

不规则的黑点和黑乎乎的一片可能是由于多种原因导致的。一个可能的原因是蛋白质本身的污染。如果样品中存在高分子量的杂质，这些杂质可能会在印迹过程中沉积在纸张上，导致不规则的黑点和黑乎乎的一片。如果您发现了这种情况，可以尝试将样品经过超滤或其他方法以去除杂质。另一个可能的原因是印迹过程中的问题。例如，如果您在印迹过程中使用了过多的染料或印迹时间过长，可能会导致过多的染料沉积在纸张上。同样，如果您在印迹过

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问丽春红染液是在封闭之前用吗？多少浓度比较好洗脱？

loveliufudan

丽春红是一种常用的核酸染色染料，它可以用来染色单纯性DNA和RNA。它通常是在封闭后使用的，因为封闭过程可以帮助保证样品在染色过程中的稳定性。丽春红的浓度通常为0.1%，但是具体的浓度可能会因为您的实验条件和要求而有所不同。建议您在使用前阅读该染料的说明书，以确定最佳的浓度。染色后，如果您发现染料未能完全洗脱，可能会影响后续的照胶。因此，建议您使用适当的方法来确保染料被完全洗脱。例如，您可以使用酒

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问自然界中的蛋白质含量测定

李亚彪111

1双缩脲法2紫外分光光度法（280nm波长）3考马斯亮蓝法4凯氏定氮法几种方法都可以测蛋白质含量，也各有优劣，试用环境

4 回答96 围观

问一抗敷错了一小时，在4℃，用TBST洗了10分钟有影响吗？

NatureBios

一个小时，抗原抗体已经结合了，清洗不掉的，

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问96孔板加完无血清1个小时细胞死亡，是污染么？其它的孔能不能过几个小时也死了？

bamboopiggy

你换培养基之前，镜下看过吗？感觉像是污染了

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问如何随机筛选对照组

毛利小五郎的徒弟

对照组可以选择单纯肺栓塞或单纯胃癌，看你的侧重

1 回答75 围观

问酵母双杂交实验

生命之星VIP

通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来捕获新的蛋白质，1. 构建重组Activation Domain（AD）融合的重组质粒（pGADT7载体）以及Binding Domain（BD）融合的重组质粒（pGBKT7载体）；2.双向酵母双杂交实验鉴定蛋白质间的相互作用

3 回答162 围观

问LPO MDA检测

huarenqiang5

建议你把浓度提高做一下试试看。

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问wb实验求救

bamboopiggy

没看到图，反正就是你的蛋白没有出来，1，如果别的条带出来了，说明你的蛋白没有问题。2，如果别的条带也出不来，说明你提的蛋白有问题。至于是不是抗体问题，最好是看看别人用没用过吧

3 回答102 围观

问请问各位大佬。这种WB双条带应该怎么跑呢，

balalaLy

条带大小相差不大，你是要区别看两条条带的话可以用12-15%的胶跑，分得开就行。

3 回答114 围观

问请问为什么跑western曝光出来的条带和丽春红染色显示出来的条带不一样呀？

bamboopiggy

丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。但是它没法特异性的识别你的目的蛋白，如果你用wb杂不出来，说明还是你的抗体不特异

3 回答291 围观

问大肠杆菌外源蛋白表达。

dxy_0mli503w

确实是要先测序的，一般来说实验室做好之后都会先送给公司帮忙测序，得到序列之后自己先分析一遍，是否与设计组有偏差，正反双链是否有问题，引物启动子序列表达是否有问题，确定了这些之后才会进行下一步。

4 回答83 围观

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