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科研学霸天团,48小时有问必答
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用来提RNA的组织样本可以在-20放多久?
陈皮712
最好1周内用完,或者放到-80冰箱、液氮以便长期保存。如果只有-20冰箱,可以在组织中加入组织保存液(很多公司有生产,不是很贵)。
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问
细胞长满但是提的RNA浓度低
陈皮712
RNA的质量还行,浓度偏低,但这个浓度也可以继续往下做。不知道你是用Trizol法还是柱法,如果是柱法提取,RNA浓度会比较低,但纯度会更好。Trizol法提取RNA的浓度会比较高,但杂质也相对较多。Trizol法用得更多一些。首先,加入Trizol后,T25瓶的细胞倒掉培养基,不用PBS清洗,直接加0.8-1ml Trizol,铺瓶,放4度冰箱充分裂解10分钟。然后,开一把新的细胞刮刀,充分刮,
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问
提取RNA扩增后质控起不来内标也起不来
Topmicro
检查一下用的引物是不是有问题。
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问
求助|如何通过ensembl代码如何查找相应的lncRNA
bamboopiggy
如果技术说他们数据库里没有,估计就是还没有命名的,你就是查也查不到,还不如看看那些有名字的,你有没有能用的。
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问
RNA高温变性后电泳会变成很多条带么?为什么?
Eason老歌迷
可能是你的样品中rna在高温中都碎裂了,成小片段了
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问
mirna慢病毒注射动物实验要注射几次?
Eason老歌迷
纯化过腺病毒:1-5×109毒量注射(1),比如纯化腺病毒滴度为1×1011PFU,则每只小鼠注射体积约为10-50ul。浓缩慢病毒:1-5×107毒量注射,如慢病毒滴度为1×10 8PFU/ml,则小鼠理论上注射100-500ul,实际上每次注射体积有严格要求(见下方),所以如果量不够,需要分多次注射,每次注射至少间隔1-2天。每只小鼠病毒注射体积:注射体积不要超过200ul,最好控制在100u
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问
求助:原代细胞提取,酶消化完离心无沉淀
Eason老歌迷
应该是有一个小圆白点。可能是你选取的组织提取的细胞太少了,也可能是酶消化时间太长了。
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问
化学合成的siRNA转染细胞时阴性对照的作用是什么,怎么设计的阴性对照
Eason老歌迷
可以设计一个空转细胞当阴性对照。
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问
RNA的检测
Topmicro
你有没有做阴性对照,看看每次的阴性对照一样吗
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问
药物通过miRNA发挥作用,动物分组该咋整?
balalaLy
control组,药物治疗组,miRNA干预组,药物+miRNA组。
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问
shRNA的引物设计及特异性问题
bamboopiggy
最好不要用,否则如果出现脱靶效应,你没法解释。
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问
RNA酶如何灭活
Topmicro
采用0.1%的DEPC溶液浸泡实验器材,通风橱是室温过夜处理,然后灭灭菌锅121摄氏度灭菌30min以上,再烘箱烘干就行。
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问
脑室注射miRNA或siRNA微量注射器需要提前处理吗?
Eason老歌迷
需要提前处理!rna遇到rna酶直接就降解了。你可以先用外源RNA酶清除剂洗,然后在用无核酸酶水清洗,密封好,下次备用。
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问
我要在六孔板用药物处理血淋巴细胞,之后该怎么提RNA呢,需要将液体都倒掉再加trizol提取吗
Eason老歌迷
肯定是先等细胞生长贴壁一段时间,加药,然后去除培养基,pbs洗一下,再加trizol来提rna啊!
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问
如何将转录组学结果和分子对接联系起来,确定一个靶蛋白?
Eason老歌迷
文献调研是必经步骤,而且也是确认研究项目是否适合分子对接的最快方法。研究者可以通过PubMed等免费文献数据库,输入自己的靶标+分子对接关键词。或者是去蛋白结构数据库(Protein data bank, PDB)是目前全球最大、信息最全的蛋白晶体结构数据,目前已经报导的结构靶标都在蛋白结构数据库上有收录
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问
shRNA设计
Eason老歌迷
不需要去掉,siRNA序列最后两个碱基TT不需要去掉。shRNA包括两个短反向重复序列,在活体中输送“小干扰RNA”(siRNA)的一种办法是,将siRNA序列作为“shRNA”克隆进质粒载体。
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问
求助:请问细胞在无血清高糖培养基环境中合成酪蛋白的时间大约能维持多久?
Eason老歌迷
细胞在无血清高糖培养基环境中合成酪蛋白的时间大约能维持在24h左右。当无血清高糖培养基中无法使细胞合成酪蛋白时,重新换新的无血清高糖培养基能够使细胞重新开始合成酪蛋白。
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问
DMSO药物配置!求解答
Miracle星
DMSO能与水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯芳烃化合物等任意互溶,但不溶于乙炔以外的脂肪烃类化合物可以说二甲基亚砜溶解性很好,具体用什么稀释看你的反应体系 了 一般水就可以
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问
骨骼肌活检定量分析相关minRNA,如何开展?
Miracle星
试验可以通过设计一个质粒,质粒上含有骨骼肌特异性的启动子,其后跟该miRNA序列。(如果是斑马鱼,可以直接将该质粒通过显微注射的方式注射到斑马鱼的受精卵中,如果是小鼠可以先在细胞水平进行验证,然后在活体水平进行验证)然后将质粒在合适的时间转入你所用实验体系,等待一定时间(自己摸索一下,或者查文献),然后在整体水平以及分子水平对骨骼肌进行评估。实验需要有miRNA组,以及没有miRNA的空白质粒对照
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问
pcr如何用NCBI设计引物?
bamboopiggy
ncbi主页右侧有个blast,点进去,然后往下拉,有一个primer blast,点进去,然后按照里面的要求填写就可以了
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