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科研学霸天团，48小时有问必答
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问
核酸斑点杂交法，室温孵育需要在摇床里吗，还是放在室温环境就行
Topmicro
重要的是均匀，有摇床最好在摇床里。
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问
疏水及方向层析和凝胶排阻层析提纯蛋白方法的各自适用于什么情形？
天一湖医者
巯水及方向层析：疏水层析也称疏水作用下层析(从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质初步的分离，用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。凝胶排
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问
核酸斑点杂交，样品点在铅笔同侧还是另外一侧
一个小哭包
应该是在哪一侧应该都可以，不影响实验
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问
核算斑点杂交，显色问题
天一湖医者
应少量屡次点样，防止样品外渗，不利于观察显色.将杂交膜封入杂交袋中，参加杂交液，应尽量除去气泡再封口.防止杂交不完全，显色不明显.
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问
Fish实验探针设计问题？
bamboopiggy
没有做过，但是查到可以去安捷伦的官网，通过 SureDesign 设计和定制针对任何区域的任何探针，
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问
请问植物原生质体制备和培养过程中维持细胞渗透压的除了甘露醇还可以用什么物质？
bamboopiggy
山梨糖醇和海藻糖也可以，但是看文献，还是用甘露醇的多。
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问
如何确定原核表达出来的蛋白质是我想要的蛋白呢？
bamboopiggy
用你目的蛋白的抗体，跑个wb不就可以了吗？
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问
核酸斑点杂交，杂交袋的使用
bamboopiggy
去某宝买个封口机就可以啊，封口机是标配
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问
核酸斑点杂交中杂交液中探针的浓度多少合适
bamboopiggy
这个要看你具体用什么探针，买的时候，公司应该都有推荐浓度，一般0.5uM
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问
酶切反应混合物的体积是否对酶切效果有影响？为什么？
府宅
有影响，加入反应的酶体积不超过反应总体积的1/10，避免限制酶活性受到甘油的影响。大多数限制酶贮存在50％甘油溶液中，以避免在-20℃条件下结冰。
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问
双酶切产物OD值过高可能是什么原因?
bamboopiggy
胶回收的260，280没法看的，只是能给你提供参考浓度，算你的插入片段和backbone的比例。
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问
双酶切怎么也没切完全，有假阳性怎么办？
bamboopiggy
你先看看你的酶切的接口会不会自连，然后可以做单酶切的对照，是否都可以同时切成线性。
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问
关于核酸斑点显色，我的膜有点小就只有undefined5
bamboopiggy
显色反应可以放皿里，也可以放杂交袋里。膜小，可以放小点的盒里，如果想扩大体积，也可以的。
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问
杂交显色的问题，我还有好多问题🙊
bamboopiggy
显色反应可以放皿里，也可以放杂交袋里。膜小，可以放小点的盒里，如果想扩大体积，也可以的。
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问
pTRK669质粒电转进入嗜酸乳杆菌
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问
预杂交液的洗膜 65摄氏度洗膜是怎么操作呢
bamboopiggy
你问的是在65度，怎么洗膜吧？你可以把预杂交液预热到65度，然后放入膜，想65度洗，可以讲带温度的摇床调到65度，也可以把普通摇床，塞到65度的孵箱里，办法总比困难多
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问
核酸斑点杂交，预杂交液和杂交液的制备
bamboopiggy
预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针，一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液，。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA，也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了，因为预杂交液不可能100%的倒出来，还是有点的。
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问
嗜酸乳杆菌电转条件及质粒体外修饰
bamboopiggy
我没有用过，但是你可以咨询你电转移仪的公司，他们应该有相应的参数。
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问
在ncbi上搜索基因序列，为什么给出的氨基酸注释与密码子表不一致呢 例如∶GAA ncbi上给出的是F，对应密码子表GAA应为E
bamboopiggy
你给的那个图太小了，我看不清楚，但是你考虑没有考虑过GAA的相对应的反向链是UUC呢？uuc正好就是F。
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问
关于核酸斑点杂交的问题
bamboopiggy
不用要求那么严格，和胶接触的面为正面，你记住你铅笔标在哪一面就好，没有那么严格的反正面。
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