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求教crisper/ptaget F系统敲除bl21de3的uxaC,设计了一对500bp上下游同源臂,重叠后和sgRNA一起电转到含pcas质粒的bl21(用30mM的d-阿拉伯糖诱导),这个菌株里面还带有一个氯霉素抗性的质粒,所以我都在固态和液体培养基中加了氯霉素50ug/ml,kan50ug/ml,电转化长出一片片的菌,没有单菌落,然后我去验证发现pcr结果敲除片段大小和对照没区别,然后pcr了pcas和sgrna,发现都p出来了,想着直接把长满菌的平板再涂后长出单菌落,可是挑单菌落到液体中过夜没有长出来,试了有抗性和没抗性就一个管长了,各位大佬能看看那有问题,查了文献也没找到问题
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