求教crisper/ptaget F系统敲除bl21de3，但是pcr结果和对照菌条带长度没区别，目前正在送样测序

求教crisper/ptaget F系统敲除bl21de3的uxaC，设计了一对500bp上下游同源臂，重叠后和sgRNA一起电转到含pcas质粒的bl21（用30mM的d-阿拉伯糖诱导），这个菌株里面还带有一个氯霉素抗性的质粒，所以我都在固态和液体培养基中加了氯霉素50ug/ml，kan50ug/ml，电转化长出一片片的菌，没有单菌落，然后我去验证发现pcr结果敲除片段大小和对照没区别，然后pcr了pcas和sgrna，发现都p出来了，想着直接把长满菌的平板再涂后长出单菌落，可是挑单菌落到液体中过夜没有长出来，试了有抗性和没抗性就一个管长了，各位大佬能看看那有问题，查了文献也没找到问题