爱学习的小盖子
所用的材料为昆虫性腺,经过氯化钾溶液低渗、卡诺氏固定液固定、吉姆萨染色。但是一直做不出来染色体分散程度很好的片子染色体,能观察到染色体分散,但其中总会有一大块聚集在一起。另外,用现配置的染液,得到的结果经常会看到大片的色素沉着,很影响观察和拍照。
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实验当天保证细胞处于对数生长期,一般一个6cm的培养皿80%的密度能做一次实验。
b. 将待测细胞从37℃,5%CO2培养箱中拿出,添加秋水仙素(终浓度为0.2ug/ml),摇匀后37℃孵育1-2小时。
c. 等待的同时,配制低渗溶液0.075M KCL(配制:8ml无菌水+44.7mg KCL),放入37℃水浴预热。
d. 孵育后的细胞用胰酶消化,1200转/分,离心5min,收集于离心管中,去除上清液,用8ml低渗液重悬,打匀后放37℃水浴箱40min。
e. 加入新鲜配制的固定液(甲醇/冰乙酸=2/1~3/1)2ml混匀,室温下放10min后,1000转/分离心10min,去上清液(留500ul, 先将底部细胞吹匀),新加入8ml固定液,1200转/分,离心10min,重复三次后,滴片,放入80℃烘箱老化3小时。
f. 再将烤干的玻片放入新鲜配制的胰酶(0.25%)中消化1min(严格控制时间)后,再放入吉姆萨染液中染色5-10分钟(先用1片染5min, 根据颜色调整后面的染色时间),取出用流水冲去染液后,在显微镜下观察结果。
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1. 滴片的载玻片需预先泡酸处理,且-20℃预冷
2. 低渗溶液要用无菌水配制
3. 低渗溶液,胰酶需要提前预热
4. 固定液,胰酶,吉姆萨染色工作液需现配现用
高山云初
首先将染色体样品在50℃的环境下放在一块热板上过夜,再用胰蛋白酶处理,以去除多余的蛋白质。之后用 Giemsa 染色,可以得到 G 显带条纹。
再用天青色素、伊红、次甲蓝混合而成的吉姆萨染料对血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等标本进行染色。吉姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。