用邻甲酚酞络合酮比色法测肽钙螯合物的钙含量时，是否需要将肽钙螯合物的钙脱除下来转变为离子钙再进行测定？如何脱除？

操作步骤：

1、制备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于 Ca的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 Ca的检测。

③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的 Ca，可以使用 ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。

2、配制 Ca显色工作液：临用前，取 Ca Assay Buffer和 OCPC显色液等量混合，即为 Ca显色工作液，即配即用；4℃避光保存，不宜久置。

3、Ca加样：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的钙离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置平行管。

4、Ca测定：混匀，室温静置 10min，以空白管调零，比色杯光径 1cm，分光光度计 575nm处检测，读取标准管、测定管的吸光度(即为 A标准，A测定)。

计算：

血清、血浆中钙(mmol/L)=(A测定/A标准)×2.5

组织中钙(mmol/mg)=(A测定/A标准)×2.5×V/待测样品质量(mg)

式中：A测定=测定管的吸光度

A标准=标准管的吸光度 V=组织提取液的总体积(L)。

注意事项：

1、溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。

2、OCPC显色液偶尔会结晶析出，配制成的显色工作液有时会析出，可取上清液使用。

3、该试剂盒对钙离子敏感度较高，测定器皿一定要干净，使用一次性聚乙烯塑料器皿。

4、可用血清或肝素抗凝血浆样本，不宜采用钙螯合剂及草酸盐做抗凝剂的样本。

5、胆红素可产生负干扰，含有较高胆红素的样本可用血

在使用邻甲酚酞络合酮比色法测定肽钙螯合物的钙含量时，通常是将螯合物中的钙转变为离子钙形式进行测定。这是因为邻甲酚酞络合酮比色法主要适用于测定游离钙离子的含量，而不是螯合物中的结合态钙。

要脱除肽钙螯合物中的钙以转变为离子钙，可以使用螯合物解离剂或其他合适的方法。以下是一种常用的方法：

1. 准备螯合物解离剂：选择适当的螯合物解离剂，例如乙二胺四乙酸（EDTA）或酒石酸等。根据实验需要，调整解离剂的浓度和pH。

2. 加入解离剂：将螯合物样品与适量的解离剂混合，以促使螯合物中的钙与解离剂形成络合物。确保充分混合，并使反应在适当的温度下进行。

3. 离心和分离：将混合物进行离心，以分离螯合物解离剂络合物和不溶性残渣。收集上清液，其中包含解离后的离子钙。

4. 邻甲酚酞络合酮比色法测定：将收集的上清液用于邻甲酚酞络合酮比色法测定离子钙的含量。根据比色法的步骤和所用试剂的说明进行测定。

请注意，选择解离剂和相应的条件需要根据具体实验要求和螯合物的特性进行优化和验证。确保选择的解离剂能有效解离螯合物中的钙，并且对测定方法没有干扰。另外，还应注意解离剂对其他实验参数（如pH、温度等）的影响，以确保实验结果的准确性和可重复性。

实验步骤中不需要把钙脱下来再测定

可以利用碱溶液把钙脱出转变为离子钙