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大家在取肺泡灌洗液的时候,如果灌洗三次,每次300ul,那每次灌洗的时候是用注射器打进去后直接回抽,需要来回抽打灌洗不
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抽取肺泡灌洗液时注射器进去后直接缓慢回抽即可,注射器不需要来回抽打灌洗液。
目前比较常见的几种肺泡灌洗液抽取方法如下:
1.方法一收集支气管肺泡灌洗液:先将气管远
小端结,将静脉留置针插入气管,连接2m
L注射器灌洗0.5mL,轻轻按摩肺组织收集灌洗液,重复3次。
2.方法二收集肺泡灌洗液:先穿两根外科缝线于气管、食管之间,将静脉留置套管针插入气管,分别在套管进入气管处、套管远端处结扎紧,连接1mL注射器灌洗0.5mL,停留30 s缓缓回抽,重复3次。
3.改进后的方法收集肺泡灌洗液:暴露小鼠气管和胸腔,用眼科弯镊钝性分离气管和食管:眼科镊支撑在气管下方,使气管整体处于撑开状态,距环状软骨远端2~3个软骨环之间结缔组织膜处剪2~3mm左右的切口:左手持眼科弯镊,提起少量气管壁,右手持自制注射器水平将塑料硬管插入气管:轻轻推动气管使塑料硬管充分到达左右支气管交叉处,可在胸腔暴露外观容是否到达,到达后,左右手持两把眼科镊一前一后夹住气管和嵌套的塑料硬管;注射器乳头衔接针栓,首次进行0.5 mLPBS溶液灌洗,观察双侧肺膨胀,停留30 s后慢慢抽取灌洗液。
静心观照
需要。
灌洗分单侧和双侧。单侧一般为颈部和胸部解剖,气管和一侧肺叶结扎。再用穿刺针插入气管上端,0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍,每遍冲洗次数根据需要决定,一般3-5次即可。
毛利小五郎的徒弟
一次灌进300ul之后抽出来就可以。
于小鱼鱼1998
不需要来回抽打,来回抽打会对小鼠造成损伤,打进去抽出来就行
高山云初
个人认为有两个做法1.检查是否将肺部插漏,或者是肺部有损伤导致漏液(此时就无法挽救)2.可以将针头来回换方位以及往回抽一点。可能是插的有点深,我一般都是在小鼠的支气管比较靠近头部插入,并且插入的深度大概0.8cm。
小Q医僧
努力搜集到的资料,希望对你有所帮助
sswei
小鼠肺泡灌洗液
一般为颈部和胸部解剖,气管和一侧肺叶结扎。再用穿刺针插入气管上端,生理盐水或PBS 反复冲洗,一般为3 遍,每遍冲洗次数根据需要决定,3-5次即可,具体操作参考:
1)操作所需的设备(除了一次性注射器,气管插管是已经灭菌的,其他设备都需要高压灭菌);
2)小鼠麻醉并固定;
3)颈部去毛并消毒;
4)从颈部正中切口;
5)暴露剥离气管,并在气管近端穿线打活结,活结要比较松;
6)在所打活结的远端,剪开气管的1/2,行气管插管,插入后线打死结;
7)用10ml 注射器抽取10ml 的灭菌生理盐水,通过气管插管注入气管内,反复抽吸三次,将液体抽出,大约能吸出7 毫升左右,放入灭菌离心管内。再抽取10ml 生理盐水,重复上面的操作两次,这两次每次能抽出肺泡灌洗液9ml 左右,也注入离心管;
8)收集的灌洗液采用0.22um 滤膜过滤,后将滤膜冻存-80°C 保存,或直接提取DNA。
小小翻车鱼
每次灌洗时,可以将300 ul的液体注入到肺泡中,然后轻轻回抽一小部分液体,以确保灌洗液充分接触到肺泡表面。
通常情况下,不需要来回抽打灌洗液,在取肺泡灌洗液时,通常使用注射器进行操作,一次注入并轻轻回抽即可。每次灌洗时,这样可以避免对肺组织造成不必要的损伤。将300 ul的液体注入到肺泡中,在操作过程中,然后轻轻回抽一小部分液体,需要注意操作的轻柔和准确性,以确保取得准确的样本。
如果有特殊的操作要求,以确保灌洗液充分接触肺泡表面,并将其中的细胞和分泌物吸出。这个过程可以重复进行三次,建议参考相关的操作指南或咨询专业人士的建议。