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如何使用液氮研磨组织?

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远方_oe7m

做代谢组学前处理,需要研磨动物组织,由于含有筋之类的东西,很难磨匀,看文献中有的是用液氮研磨,我想请教一下液氮研磨具体是怎么操作的?之前有试过,是将组织剪碎后放入研磨罐,然后把研磨罐放入液氮中5min后用研磨仪研磨,但是根本磨不动,我接下来想试一下把组织剪碎放入研钵中,然后倒入液氮手动研磨,可行吗?这样的话有一个问题就是直接把液氮倒到样本中会污染样本影响我后续的代谢物提取吗?

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7 个回答

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dxy_mqg1dtg8

有帮助

液氮研磨是一种有效的样品制备方法,但是需要注意一些安全和操作问题。

首先,将组织剪碎后放入研磨罐中,然后将研磨罐放入液氮中,等待5分钟,这个步骤是正确的。但在研磨之前,需要等待样品回到常温,这样才能进行研磨,否则样品会过于脆弱而无法研磨。

其次,如果样品不易研磨,可以尝试将样品放入液氮中浸泡更长时间,或者重复浸泡和研磨的步骤,直至样品研磨均匀。

关于手动研磨方法,将组织剪碎后放入研钵中,然后倒入液氮手动研磨是可行的,但需要注意安全问题,因为液氮非常冷,接触液氮会导致严重的冷烫伤。因此需要戴手套和护目镜,同时要将液氮倒入研钵时小心操作,以避免溅出液氮。

最后,液氮研磨后的样品中确实会残留一些液氮,但通常不会对后续代谢物提取产生影响,因为液氮会快速挥发。如果担心样品受到污染,可以将样品在常温下干燥一段时间,然后再进行代谢物提取。

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FrEShAIFE

有帮助

你这样的操作不太可行,倒入液氮会对里面的成分有影响。正确操作是,再组织研磨仪中,先将组织磨碎,然后快速放入液氮中速冻,冻好时候再进行研磨,如此反复。

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沫子大大

有帮助

可以将组织样品剪碎成小块,放入研钵中。在研钵中加入适量的液氮,使样品被液氮完全覆盖。等液氮完全蒸发后使用研钵和研钵架,将样品用手动或自动研磨仪研磨成细小的颗粒。将研磨后的样品转移到离心管中,并在离心管中进行代谢物提取和分析。

手动研磨方法,理论上是可行的。不过需要注意的是,手动研磨可能会使样品研磨不均匀,影响后续的代谢物提取和分析结果。另外,直接倒入液氮可能会污染样品,影响代谢物的检测。建议在研磨之前使用无菌钳或者无菌手套将组织样品取出,避免手部接触样品。同时,在液氮蒸发完毕后,可以用洁净的无菌纸巾轻轻擦拭研钵和研钵架,以去除液氮残留。

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来一起探讨

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液氮可以瞬间冰冻组织,极低的温度可以使组织和细胞都变得很脆,通过手动研磨方便破碎细胞,释放出内部核酸,同时极低的温度也可以抑制RNA酶活性,降低RNA的降解,同时可以边加入少量液氮边碾磨。

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dxy_xextz7w2

有帮助

动物组织研磨由于组织太硬的话一般都是选择手动研磨,将组织放在研钵里面,然后加入液氮,再进行手动研磨至粉末状,最后收集起来进行下一步处理,这样得到的产物比较均匀,利于后续实验进行

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loveliufudan

有帮助

以下是液氮研磨的一般操作步骤:

1. 准备工作:戴上适当的个人防护装备,如手套和护目镜。确保操作环境通风良好。

2. 组织剪碎:将动物组织切成小块或小片。可以使用锋利的手术刀、组织剪或切片机等工具进行操作。确保组织块的大小适合研磨,并尽量去除筋、脂肪等难以破碎的部分。

3. 液氮准备:将液氮倒入合适的容器中,确保容器足够大以容纳样品,并迅速产生大量的液氮蒸汽。

4. 研磨操作:将组织样品放入研钵(或研磨罐)中。然后将研钵悬浮在液氮中,注意不要直接接触液氮,以免冻伤。使用研磨杵或手持式研磨器具在液氮中研磨样品。使用手持式器具时,确保频繁地翻动和搅拌样品,以获得均匀的研磨效果。持续研磨时间应根据样品的性质和需求而定,通常在几分钟内。

5. 样品收集:将研磨后的样品迅速收集到适当的容器中。可以使用预冷的离心管或瓶子等容器。避免样品与液氮直接接触,以防止液氮的污染。

液氮研磨可以有效地破碎组织样品,但确保在操作过程中安全和谨慎。直接将液氮倒入样品中可能导致样品污染,并且可能对后续的代谢物提取和分析产生影响。因此,建议使用研钵或研磨罐来容纳样品,并在液氮中进行研磨。

在研磨后,应尽快将样品转移到预冷的离心管或其他容器中,以防止进一步的冻结和样品的污染。样品的进一步处理和代谢物提取应根据实验方案和研究要求进行。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

步骤如下:

1、将研钵从烘箱内拿出,用专用容器盛一些液氮备用;

  2、将液氮小心加入并浸满研钵,浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时,缓慢加入,防止液氮飞溅);

  3、当第一次加入的液氮挥发后,立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵),将组织迅速转移至液氮内,确保组织全部浸没在液氮中;

  4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织,将组织打碎成小块,要注意切勿用力过度,要防止组织块飞溅出研钵;在液氮即将挥发完时,使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意,若为植物样本可直接用研杵碾压组织);

  5、待液氮挥发完后,立即加入1/3研钵体积的液氮(注意,加入液氮速度要缓慢,切勿使得液氮冲击力过大,将组织样本冲出研钵),迅速用研杵研磨组织,根据组织状态的变化程度,在确保组织始终处于冰冻状态下,及时补充液氮进行研磨,(一般30s~1min补充一次,至少需要补充3次以上),直至组织被研磨成粉末状。

  6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解,若裂解液冻于研钵内壁,用研杵轻轻敲击下来,继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合,研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作;

  7、静置至样本和裂解液混合物融化,将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中,插入冰块上暂存。

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