如何使用液氮研磨组织？

液氮研磨是一种有效的样品制备方法，但是需要注意一些安全和操作问题。

首先，将组织剪碎后放入研磨罐中，然后将研磨罐放入液氮中，等待5分钟，这个步骤是正确的。但在研磨之前，需要等待样品回到常温，这样才能进行研磨，否则样品会过于脆弱而无法研磨。

其次，如果样品不易研磨，可以尝试将样品放入液氮中浸泡更长时间，或者重复浸泡和研磨的步骤，直至样品研磨均匀。

关于手动研磨方法，将组织剪碎后放入研钵中，然后倒入液氮手动研磨是可行的，但需要注意安全问题，因为液氮非常冷，接触液氮会导致严重的冷烫伤。因此需要戴手套和护目镜，同时要将液氮倒入研钵时小心操作，以避免溅出液氮。

最后，液氮研磨后的样品中确实会残留一些液氮，但通常不会对后续代谢物提取产生影响，因为液氮会快速挥发。如果担心样品受到污染，可以将样品在常温下干燥一段时间，然后再进行代谢物提取。

你这样的操作不太可行，倒入液氮会对里面的成分有影响。正确操作是，再组织研磨仪中，先将组织磨碎，然后快速放入液氮中速冻，冻好时候再进行研磨，如此反复。

可以将组织样品剪碎成小块，放入研钵中。在研钵中加入适量的液氮，使样品被液氮完全覆盖。等液氮完全蒸发后使用研钵和研钵架，将样品用手动或自动研磨仪研磨成细小的颗粒。将研磨后的样品转移到离心管中，并在离心管中进行代谢物提取和分析。

手动研磨方法，理论上是可行的。不过需要注意的是，手动研磨可能会使样品研磨不均匀，影响后续的代谢物提取和分析结果。另外，直接倒入液氮可能会污染样品，影响代谢物的检测。建议在研磨之前使用无菌钳或者无菌手套将组织样品取出，避免手部接触样品。同时，在液氮蒸发完毕后，可以用洁净的无菌纸巾轻轻擦拭研钵和研钵架，以去除液氮残留。

液氮可以瞬间冰冻组织，极低的温度可以使组织和细胞都变得很脆，通过手动研磨方便破碎细胞，释放出内部核酸，同时极低的温度也可以抑制RNA酶活性，降低RNA的降解，同时可以边加入少量液氮边碾磨。

动物组织研磨由于组织太硬的话一般都是选择手动研磨，将组织放在研钵里面，然后加入液氮，再进行手动研磨至粉末状，最后收集起来进行下一步处理，这样得到的产物比较均匀，利于后续实验进行

以下是液氮研磨的一般操作步骤：

1. 准备工作：戴上适当的个人防护装备，如手套和护目镜。确保操作环境通风良好。

2. 组织剪碎：将动物组织切成小块或小片。可以使用锋利的手术刀、组织剪或切片机等工具进行操作。确保组织块的大小适合研磨，并尽量去除筋、脂肪等难以破碎的部分。

3. 液氮准备：将液氮倒入合适的容器中，确保容器足够大以容纳样品，并迅速产生大量的液氮蒸汽。

4. 研磨操作：将组织样品放入研钵（或研磨罐）中。然后将研钵悬浮在液氮中，注意不要直接接触液氮，以免冻伤。使用研磨杵或手持式研磨器具在液氮中研磨样品。使用手持式器具时，确保频繁地翻动和搅拌样品，以获得均匀的研磨效果。持续研磨时间应根据样品的性质和需求而定，通常在几分钟内。

5. 样品收集：将研磨后的样品迅速收集到适当的容器中。可以使用预冷的离心管或瓶子等容器。避免样品与液氮直接接触，以防止液氮的污染。

液氮研磨可以有效地破碎组织样品，但确保在操作过程中安全和谨慎。直接将液氮倒入样品中可能导致样品污染，并且可能对后续的代谢物提取和分析产生影响。因此，建议使用研钵或研磨罐来容纳样品，并在液氮中进行研磨。

在研磨后，应尽快将样品转移到预冷的离心管或其他容器中，以防止进一步的冻结和样品的污染。样品的进一步处理和代谢物提取应根据实验方案和研究要求进行。

步骤如下：

1、将研钵从烘箱内拿出，用专用容器盛一些液氮备用；

　　2、将液氮小心加入并浸满研钵，浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时，缓慢加入，防止液氮飞溅)；

　　3、当第一次加入的液氮挥发后，立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵)，将组织迅速转移至液氮内，确保组织全部浸没在液氮中；

　　4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织，将组织打碎成小块，要注意切勿用力过度，要防止组织块飞溅出研钵；在液氮即将挥发完时，使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意，若为植物样本可直接用研杵碾压组织)；

　　5、待液氮挥发完后，立即加入1/3研钵体积的液氮(注意，加入液氮速度要缓慢，切勿使得液氮冲击力过大，将组织样本冲出研钵)，迅速用研杵研磨组织，根据组织状态的变化程度，在确保组织始终处于冰冻状态下，及时补充液氮进行研磨，(一般30s~1min补充一次，至少需要补充3次以上)，直至组织被研磨成粉末状。

　　6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解，若裂解液冻于研钵内壁，用研杵轻轻敲击下来，继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合，研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作；

　　7、静置至样本和裂解液混合物融化，将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中，插入冰块上暂存。