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若杂交液含探针十几微升,每个探针不是都要十几微升,根据具体的DNA调整用量
土井挞克树
1.杂交膜气泡如果已经产生,一般选用震荡的方式去除。
2.杂交液中鲑鱼精可以起到封闭样品中非特异性片段的作用
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1. 去除杂交膜气泡的方法可以包括以下几种:
• 轻轻摇动或振荡杂交膜:使用震荡器或轻轻摇动杂交膜,有助于气泡的释放和排除。
• 避免气泡形成:在制备杂交液的过程中,尽量避免产生气泡,例如缓慢注入探针、混匀杂交液等。
• 使用去泡剂:添加适量的去泡剂(如去泡液、液体表面活性剂等)到杂交液中,有助于降低气泡的生成和保持。
2. 杂交液中鲑鱼精的作用是提供一种富含DNA的源,它可以与探针中的互补序列发生杂交反应。鲑鱼精中的DNA可以作为目标DNA与探针DNA进行互补配对,从而实现目标DNA的检测。
3. 探针浓度的选择需要根据具体实验要求和目标检测的灵敏度来决定。通常,较高的探针浓度可以提高信号强度,增加检测的灵敏度。然而,过高的探针浓度可能会导致非特异性结合或背景噪音的增加。因此,需要进行浓度优化实验,找到适合特定实验条件的探针浓度。
对于每个探针都需要使用十几微升的情况,如果探针之间的特异性不同或目标DNA的浓度有所不同,可以根据需要调整每个探针的浓度。可以尝试使用不同的探针浓度,然后进行实验评估,以找到最佳的探针浓度组合,以保证检测的特异性和灵敏度。
dxy_s6csd9er
您好,感谢您认真回答,还想请教一下:
如果杂交之后0.1*ssc 0.1%sds洗涤20min在室温条件进行了,忘记设置65摄氏度,后面第二次洗涤的20min在65摄氏度进行,还需进行第三次洗涤吗
就是说不在加热条件下的洗涤有效果吗?