用香豆素6染纳米颗粒后在水中透析的操作方法

1.将香豆素6溶于DMF配制5 mg/mL有机相溶液。

将载体材料（如PLGA或HPMC）溶于水或HBSS配制一定浓度的水相溶液。

2.用乳化-溶剂挥发法制备香豆素6纳米颗粒，即将有机溶液加入水相溶液中，在冰水浴条件下，用超声波细胞粉碎仪间断超声数分钟后，转移至低浓度的PVA挥去有机溶剂，得到香豆素6纳米颗粒。

3.用葡聚糖凝胶柱将载香豆素6的纳米颗粒和游离香豆素6分离，即取溶胀24小时以上的Sephadex G-50装柱，精密量取1 mL纳米颗粒胶体液上样，用去离子水洗脱，收集分离所得的香豆素6纳米颗粒。

4.用高效液相色谱仪测定香豆素6纳米颗粒的包封率和利用率，即将分离所得的纳米颗粒和游离香豆素6分别用甲醇-水（95:5）溶解后进行HPLC分析，检测波长为激发波长Ex=466 nm，发射波长Em=504 nm。

(1) 将 Coumarin 6 溶于 DMF 配制 5 mg/mL 有机相溶液。

(2) 将羟丙基甲基纤维素 (HPMC) 溶于 HBSS 配制 50 μg/mL 水相溶液。

(3) 用 MasterFlex L/S 泵将有机溶液加入水相溶液中 (有机溶液与水相溶液体积比为 1：100)，注射速度为 36 mL/min。

(4) 室温搅拌 5 min，搅拌速度为 9 mL/min 的条件下制备 70 nm 的纳米颗粒。

(5) MDCKII 细胞培养皿中加入 2 μg/mL 的纳米颗粒，暗处孵育 5 min、15 min、30 min 和 60 min。

(6) 加入低温 PBS 缓冲液以中止 MDCKII 细胞摄取纳米颗粒，并用 HBSS 清洗。

(7) 使用荧光显微镜观察 MDCKII 细胞摄取纳米颗粒的情况。