谦谦千千
loveliufudan
1.将香豆素6溶于DMF配制5 mg/mL有机相溶液。
将载体材料(如PLGA或HPMC)溶于水或HBSS配制一定浓度的水相溶液。
2.用乳化-溶剂挥发法制备香豆素6纳米颗粒,即将有机溶液加入水相溶液中,在冰水浴条件下,用超声波细胞粉碎仪间断超声数分钟后,转移至低浓度的PVA挥去有机溶剂,得到香豆素6纳米颗粒。
3.用葡聚糖凝胶柱将载香豆素6的纳米颗粒和游离香豆素6分离,即取溶胀24小时以上的Sephadex G-50装柱,精密量取1 mL纳米颗粒胶体液上样,用去离子水洗脱,收集分离所得的香豆素6纳米颗粒。
4.用高效液相色谱仪测定香豆素6纳米颗粒的包封率和利用率,即将分离所得的纳米颗粒和游离香豆素6分别用甲醇-水(95:5)溶解后进行HPLC分析,检测波长为激发波长Ex=466 nm,发射波长Em=504 nm。
毛利小五郎的徒弟
(1) 将 Coumarin 6 溶于 DMF 配制 5 mg/mL 有机相溶液。
(2) 将羟丙基甲基纤维素 (HPMC) 溶于 HBSS 配制 50 μg/mL 水相溶液。
(3) 用 MasterFlex L/S 泵将有机溶液加入水相溶液中 (有机溶液与水相溶液体积比为 1:100),注射速度为 36 mL/min。
(4) 室温搅拌 5 min,搅拌速度为 9 mL/min 的条件下制备 70 nm 的纳米颗粒。
(5) MDCKII 细胞培养皿中加入 2 μg/mL 的纳米颗粒,暗处孵育 5 min、15 min、30 min 和 60 min。
(6) 加入低温 PBS 缓冲液以中止 MDCKII 细胞摄取纳米颗粒,并用 HBSS 清洗。
(7) 使用荧光显微镜观察 MDCKII 细胞摄取纳米颗粒的情况。