OPA法测定蛋白质酶解液的水解度
dxy_769w2o03
目前正在做酶解，但用过很多测定水解度的方法，都存在问题，人都快奔溃了；
茚三酮测定的水解度值在50%以上，不知道什么因素影响导致值偏这么高；
甲醛滴定法不知什么原因影响导致滴定出来数值又特别小，酶解后和未酶解消耗标准氢氧化钠溶液的体积之差不大，而且不同酶水解的结果差不多，就好像酶没有水解；后面查阅文献又看到说甲醛滴定法不能用于测定蛋白质酶解液的水解度，但是确实又有人用过，但我的实验又不能用，现在不知道是方法不合适，还是我自己的问题；
这周查阅文献发现新的方法-OPA法测定水解度，本以为 会顺利，但是后面测定时那个吸光度值一直在变化，往上升，不知道应该取什么数，或者说我的酶解液有问题；然后这个方法文献中提到的水解度的计算方法时酶解液中氨基肽氮的含量/完全水解液中氨基态氮的含量，标曲很正常，R2=0.9997，但是一到样品测定就出现很多问题，完全水解液的吸光度值没有酶解液的大，甚至可以说很小，完全水解液的制备：1mL蛋白溶液+9mL 6mol/L 盐酸，115℃烘箱水解48h,难道说是水解世界太长，我看文献中提到的是说将酶解液再加盐酸水解18h,这样也是可以的吗？求求uu们救救，答疑解惑一下吧，人都快自闭了
5 个回答
EzraY
您好，请问您做出来了吗，我最近也在找测水解度的实验方法，看到一篇文章用opa法做标曲时是检测待测液和Opa溶液反应2分钟时的数值，不知道是不是因为这个反应时长影响很大呢
dxy_4ugkh2r5
你好，请问做标曲出来的数值都很低，都是无效数值是什么原因，丝氨酸的浓度是按文献做了0.9516mmol/L的。谢谢
sswei
应在PH值7左右进行水解度的试验。
dxy_769w2o03
是说将酶解液以及完全水解液的ph均调至7，然后再进行OPA法测定水解度吗？
土井挞克树
可以加盐酸后再水解，10小时左右就够了。
dxy_769w2o03
取不同的酶解液加盐酸水解嘛？那1ml加9ml 6mol盐酸水解？那之后用opa测定时是不是需要将完全水解液的ph调至碱性呢？我看原理说是在碱性条件，opa试剂与-NH2反应，之前的测定是没有调ph这一步
loveliufudan
酶解液的水解度可以用多种方法来测定，但不同的方法有不同的适用范围和局限性，需要根据具体情况选择合适的方法。对于你目前遇到的问题，可能是以下几个方面的原因：
实验条件问题：不同的实验条件（如温度、酶浓度、反应时间等）可能会影响酶解液的水解度测定结果。你可以尝试在一定范围内调整这些实验条件，找到最适合的条件来进行水解度测定。
检测方法问题：不同的检测方法对样品有不同的要求和适用范围，可能会导致测定结果的误差。在选择检测方法时，需要根据具体的实验需求和样品特性，选择最合适的方法来进行水解度测定。
样品问题：酶解液中可能含有一些干扰物质，如脂肪、多肽等，这些物质可能会干扰水解度测定结果。你可以尝试对样品进行纯化或者去除干扰物质的方法，来减少干扰对测定结果的影响。
关于你提到的甲醛滴定法不能用于测定蛋白质酶解液的水解度的问题，可能是因为甲醛滴定法只适用于含有少量氨基酸的样品，而蛋白质酶解液中氨基酸的含量较高，会产生干扰。如果你想使用甲醛滴定法来测定蛋白质酶解液的水解度，可以尝试使用前处理方法，如分离或纯化蛋白质中的氨基酸。
至于新的方法-OPA法测定水解度，你可以再尝试优化实验条件，如调整反应时间、温度等，以获得更准确的结果。同时，完全水解液的制备也需要注意，如水解时间、溶液pH等因素都可能会影响测定结果。可以参考文献中的方法，或者尝试不同的制备方法，找到最适合的条件。
