啦啦啦啦46
实验要表达一个真核蛋白,构建在pcDNA3.1中,用的Expi293细胞做顺转,发现为包涵体蛋白,之后做检测,表达量低并且Ni柱纯化后特别杂,有没有什么可以优化的地方?
土井挞克树
提高样本量,考虑是包涵体浓度太低。
loveliufudan
若您的实验出现表达量低和包涵体蛋白现象,您可以考虑以下方法来优化:
调整转染条件:您可以调整转染时间、转染温度、转染浓度等,以确保转染效率最大。
更改载体:您可以考虑更换与表达系统更匹配的载体,以有利于蛋白表达。
调整培养条件:您可以调整培养基组成、培养温度、培养pH等,以有利于蛋白的表达和纯化。
更改表达系统:您可以考虑更换其他表达系统(如活细胞、质粒表达等),以确保最佳表达效果。
蛋白纯化:您可以探究不同的蛋白纯化方法(如单分子链球蛋白亲和纯化、硅胶纯化等),以确保最佳纯化效果。
请注意,每种蛋白的情况不同,可能需要调整多种因素才能获得最佳表达和纯化效果。