抗体染色后细胞荧光反而比未染色更低？

1.封闭的时间太短，导致非特异性染色或者内源性过氧化物酶活性反应。

2.标记抗体染色的条件不合适，抗体浓度过高、pH值没调整好、洗过量的抗体不充分。

3.光源的波长选择错误。

4.试剂失效或者被污染。

照的时间和次数如何，是不是发生了淬灭，或者片子加液过程中有没有让片子变干，再或者固定的时候过长导致抗原表位之间发生了胶连，产生了假阴性。。。等等

从以下几点找原因：

1、抗体稀释比例是否合适

2、抗体特异性

3、细胞固定和通透

4、封闭条件的优化选择

5、一抗二抗的选择是否正确

先把自身荧光去掉，然后缩短染色时间