scfv抗体如何制备

具体可以看看这篇文献”全人源抗狂犬病病毒G蛋白scFv中和抗体制备及活性鉴定”。

单链抗体scfv的制备和培养方案，丁香通也有（见图），你可以修改一下直接用作protocol

scFv可在多个表达系统中进行表达，目前比较常用的，是大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统。通过噬菌体展示技术也可生产得到scFv片段。通过免疫动物实验得到杂交瘤细胞，从中提取cDNA，利用逆转录PCR（RT-PCR）得到全套抗体的重链可变区V_H与轻链可变区V_L，利用重叠PCR（SOE-PCR）将V_H，V_L片段拼接扩增得到单链抗体可变区基因片段（scFv）。将scFv基因克隆到合适的噬菌体载体中，电转感受态大肠杆菌，辅助噬菌体超染，得到的上清液即为单链抗体库。以特异性抗原为固相，经3~5轮的“吸附-洗脱-扩增”筛选，即可得到富集的能与抗原特异性结合的单链抗体。

目前多使用的是噬菌体表面展示技术制备scFv，根据抗体基因的来源，一般将抗体库分成天然抗体库（naive antibody library）、免疫抗体库（immune antibody library）、合成抗体库（synthetic antibody library）以及半合成抗体库（semi-synthetic antibody library）等几类。

制备过程如下：

1.抗体基因的克隆及重组。一般利用抗体可变区基因骨架区的特异性简并引物，通过PCR扩增出抗体重链和轻链可变区的基因，通过接头linker拼接成完整的scFv基因。

2.抗体基因表达载体的构建及表达。扩增成功的scFv基因转入噬菌粒载体，并转化宿主细胞，构建噬菌体单链抗体库。

3.噬菌体单链抗体库的富集、筛选。通常是用固相化的抗原与噬菌体抗体库孵育，通过数次吸附、洗涤、洗脱、扩增过程，可使特异的噬菌体得到109的富集，每一个噬菌体代表了一个抗体。

4.scFv单链抗体的可溶性表达。在单链抗体基因构建中，单链抗体基因C末端可引入c-Myc、组氨酸、GST、MBP、脂类标签等，使表达产物更易于检测和纯化。