大家做过抗菌肽的体外血浆稳定性实验么

实验方法：

1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液，4 ˚C下保存备用。2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管中第 1 页的MH肉汤，37 ˚C，180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至undefined10^5-undefined10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 µL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 µLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。37 ˚C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍）3.最小抑菌浓MICmininmalinhibitoryconcentration）就是能阻止50%以上细菌生长的最小肽浓度。用酶第 2 页标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 µL涂布到MH琼脂平板上，37 ˚C培养18 h，以此来确定肽的MBC。参考文献：【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273.