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巢式PCR操作简单,所需条件与常规PCR相同,但与常规PCR相比进一步提高了反应的特异性与灵敏性,在微生物学、生物信息学、生物医学等方面有着极其广泛的应用。例如巢式PCR技术与RFLP(限制性片段长度多态性)技术结合,通过设计高度保守序列的引物对待检物种DNA进行PCR扩增,对PCR产物进行RFLP分析,从而完成DNA分子水平上的多态性检测,该法常用于流行病学的调查和临床常规检测。
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1、克服了单次扩增平台期效应的限制,使扩增倍数提高,从而极大的提高了PCR的敏感性;
2、由于模板和引物的改变,降低了非特异性反应连续放大进行的可能性,保证了反应的特异性;
3、内侧引物扩增的模板是外侧引物扩增的产物,第二阶段反应能否进行,也是对第一阶段反应正确性的鉴定,因引可以保证整个反应的准确性及可行性。
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巢式pcr对比较复杂的结构,可以通过先扩增长片段,然后再扩增目的片段。普通pcr可能扩增不出来