酶切目的基因及质粒载体后加Loading buffer终止反应,然后要直接进行连接反应,可以吗?要是不行,还有一种方法就是加热灭

酶切目的基因及质粒载体后加Loading buffer终止反应,不能直接进行连接反应，需要跑胶进行胶回收后，再进行连接反应。不建议用加热灭活限制酶的方法，因为酶切后跑胶，1是可以鉴定酶切产物对不对，2是可以进行纯化，去掉酶切带来的盐，有利于进行下一步的连接。

如果需要切胶回收的就不需要灭活。不同公司不同的酶采用的灭活的方法也不一样，有65度灭活的，有乙醇沉淀的，还有的必须用酚/氯仿抽才能灭活，每个公司的目录都附有一张相关的表的，可以查一下。

1、一般直接用2倍体积的无水乙醇沉淀目的片段，干燥后直接用水溶解连接即可。比较适用于载体和PCR很好。

2、酶切后要胶回收后再连接，另外酶切结束后,直接电泳回收不用加终止液,对连接没有影响

3、有的公司的限制酶(如NEB)是不需要热灭活的，而有的公司的限制酶(如MB) 则需要热灭活

钟。然后经凝胶回收后再作连接，目的片段与质粒的摩尔比在3~10:1的范围内连接效果都不错。

4、通常随酶附送的loading bufer是含有SDS起到灭活的作用，但在上样时会产生很多泡沫。