做药鹏
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首先确认你用的直标抗体的荧光染料是什么,再确定该抗体的来源种属,选择相应的同型对照。
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买抗体的时候,公司会有同型igG的对照。也就是说你买同样荧光直标的igG抗体,作为对照就好
小布丁瑶瑶
1、直接法
(1)标本自发荧光对照
标本只加PBS或缓冲甘油封片,荧光显微镜观察组织内如果有荧光,称为自发荧光。
(2)抑制试验
可分为一步方法和二步方法。
一步抑制方法:先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合,再加在标本上染色,结果应为阴性。
二步抑制方法:标本先加未标记的特异性抗体,水洗后再加标记荧光抗体,结果应呈阴性或明显减弱的荧光。
(3)阳性对照
用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织化学染色,结果应呈阳性荧光。如对照1和2无荧光或弱荧光,3待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。
2、间接法
(1)自发荧光对照:同直接法。
(2)荧光抗体对照:标本只加间接荧光抗体染色,结果阴性。
(3)抑制试验:同直接法。
(4)阳性对照:同直接法。
结果:如对照(1)、(2)、(3)均呈阴性,阳性对照和待检标本呈阳性荧光则为特异性荧光。