结肠癌小鼠模型如何制备？

制备方法： 采用腹腔注射AOM和引用DSS的联合方法建立结肠癌模型。

第一天小鼠腹腔注射10mg/kg AOM，2天后饲喂2％DSS连续5天，如此一周为一个循环，至少6周才能成模。

判定指标 （1）显微镜观察黏膜的损伤程度，炎症、溃疡以及肿瘤发生等变化

（2）组织病理检测

实验动物 小鼠 健康雌性 4-6周体重18-22g生活环境25±2°C，相对湿度40±10%，12：12光暗周期，适应性饲养一周，并可自由饮水和进食。造模方法第一天小鼠腹腔注射10mg/kg AOM，2天后饲喂2％DSS连续5天，如此一周为一个循环，至少6周才能成模。实验结果病理变化结肠明显缩短,粘膜增厚、淋巴结肿大,杯状细胞缺失、隐窝缺失,小部分动物出现腺瘤性息肉、肿瘤样改变。

1)小鼠皮下移植瘤模型的建立(2. 1)将肿瘤组织放置在含庆大霉素的生理盐水中浸泡2min，取出组织，反复用 生理盐水冲洗三分钟，冲洗后标本组织无血液，将肿瘤组织用无菌眼科剪分割成直径1. 5mm 大小，放在无菌培养皿中；(2. 2)用20号套管针把剪好的肿瘤组织分别移植到裸小鼠及BNX小鼠右侧背部近 腋部皮下，压迫伤口，无出血。每次套管针在电热真空灭菌器中灭菌； (2. 3)将小鼠放入小鼠IVC系统饲养；(2.4)等待肿瘤形成约15mm左右，无菌切除皮下肿瘤，选择实性肿块，取材剪成 1. 5mm3小块，移植于另外小鼠，传三代；(3)结肠癌原位模型的建立(3. 1)利用实验二所获得的第四代裸小鼠皮下移植瘤作为瘤源，将肿瘤组织放置 在含庆大霉素的生理盐水中浸泡2min，取出组织，反复用生理盐水冲洗3min，冲洗后标本 组织无血液，将肿瘤组织用无菌眼科剪分割成直径1. 5mm大小，放在无菌培养皿中备用；(3. 2)裸小鼠8只，禁食12h，3 %戊巴比妥溶液麻醉裸小鼠；(3. 3)将小鼠仰卧固定于操作台上，75%酒精消毒皮肤；(3. 4)取腹部正中切口，寻找到盲肠，钳出盲肠，于盲肠末端用手术刀背轻轻划破 浆膜面，用无齿镊将盲肠末端向内推压，使局部形成壁龛，将直径1. 5mm的肿瘤组织塞入壁 龛内，表面滴生物蛋白胶，使胶覆盖瘤体表面，与盲肠粘合好，将盲肠回纳入腹腔，3-0可吸 收线连续缝合关腹；(3. 5)伤口再次消毒后进入IVC系统饲养；(4).观察项目(4. 1)分别记录每一次皮下移植瘤小鼠肿瘤生长情况及成瘤率，皮下移植瘤等待 肿瘤生长到1.5mm时，取第四代裸小鼠皮下移植瘤标本，将肿瘤组织10%甲醛固定，石蜡包 埋，切片HE染色。(4. 2)观察原位模型的肿瘤生长情况，人结肠癌组织原位移植后，定时观察裸小鼠 的全身状况，运动情况，腹部体征。当荷瘤小鼠出现明显消瘦，弓背，精神萎靡等衰竭体征时 将裸鼠处死，解剖原位移植模型，观察原位肿瘤生长情况，腹腔脏器转移情况及淋巴结转移 情况