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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞经常染支原体怎么办，也在用杀支原体的药，就是经常反复

府宅

1）药物辅助加温处理：先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在 41℃ 培养 18 小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。2）免疫反应清除法：主要包括有动物体内接种除菌法和体外吞噬细胞吞噬法，前者是把受污染的细胞接种在动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖；而后者从动物腹腔采取巨噬细胞并对其进行纯化，加入被污染的细胞培养液

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问做实验老是没有重复性，不能确定自己操作准确，很苦恼，也不知道操作问题还是实验确实不行。有没有大佬指点

whilt-shirt

换个人同样的操作，或者自己一步步操作，找师兄师姐在旁边督促看看

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问RNA提取没有沉淀是什么原因？

wuli猫宁

有时候看不到沉淀，说明你用的细胞或组织太少，RNA比较少，亦或者RNA不低，但看不到沉淀，可能离心时RNA没聚集在一起，散贴在管壁！对于这两种情况，不要灰心，实验不一定失败！取15ul的无RNA水（不要太多），把管壁好好洗洗，RNA就会溶解在水里，一般情况，RT后，也足够做好几次实验了！

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问何为基因工程抗体？？

dxy_gwrp7ndq

目前在临床试验中基因工程抗体约占生物制剂的30%。重组抗体的体积越来越小，或被重新构建成多价分子，或与其它分子相融合，如放射性核素、毒素、酶、脂质体和病毒。重组技术的出现使筛选、人源化、抗体的生产得到革新，并取代杂交瘤技术，从而使以抗体为基础的药剂设计成为可能。

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问Nanopore测序数据和RNA-seq数据的标准化方式一样吗？

43 围观

问RNA浓度低/质量差的原因及解决办法有哪些？

dxy_gwrp7ndq

得率过低：提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底；解决方法：可以使用适当质量的组织或细胞进行提取，样本前处理一定要做好，裂解应充分。

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问酵母单杂实验中已经转入启动子的感受态转入转录因子后阳检不出来是什么原因？或者大家阳检酵母的方法一般是哪些？

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问如何提高实验数据准确性？

小兮的十八天

实验设计无误，保证实验操作步骤标准无遗漏，至少设置三次重复实验。

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问利用WB检测asc寡聚化

dxywode

一般做蛋白的寡聚化，用交联的方法，可以分为In vivo 和in vitro两种情况。in vivo：用Cross－linker（such as DTSSP)处理细胞一定时间，如果你的蛋白是寡聚体形式存在，它可以把你的四聚体交联在一起，那么用不含DTT的裂解液收集细胞，然后跑胶，western，你可以看到在分子量4倍的地方有条带，设好各种对照，你可以判断出那是不是你的四聚体形式。这里就讲个原理，具

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问想问一下大家有观察过PCMV6表达载体和PCDNA3.1表达载体的表达效率差异吗？大概有多少倍呀？

txs900416

这两个载体都是高拷贝载体，表达也都是CMV为启动子，差异不大啊

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问免疫疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些

dxy_gwrp7ndq

主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

2 回答85 围观

问我目前在做无脊椎动物免疫，但我想了解一下，在人体中或者哺乳动物中有没有叫做“免疫占位”的现象，通俗来说就是一种药物可以占住病毒。

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问做实验需要的抗体如何制备？

府宅

抗体制备要点：1.这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?（功能性要求）2.是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求?（便利性要求）3.抗体需要什么种属来源（兔子、山羊、大鼠或小鼠等）?（抗体属性要求）4.需要多抗还是单抗?（品质性要求）；5.已具备的抗原信息或材料（抗原信息或材料：CDS序列，重组质粒，重组蛋白、多肽等）?（可能性要求）；6.是否可

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问用什么天平或仪器称量有磁性或带静电的物体？

dxywode

电子天平春夏季使用产生静电的解决方法静电一：空气干燥，室内湿度低于45% 解决方法:我们可以在室内或电子天平周围增加湿度，使之在70%左右为宜，就会解决此问题；静电二：称量时电子天平被称物体带静电解决方法:我们可以除去被称物的静电再进行称量；静电三：天平操作者衣服或使用的工具有静电解决方法:操作者使用天平前应先用手触摸墙壁等除去静电。

3 回答88 围观

问表达蛋白的时候总是会出现内涵体，怎么避免这种情况呢？

小布丁瑶瑶

可以使用中等强度或弱的启动子，低温培养，有限的诱导，优化培养基条件，进行融合表达，可以避免出现内涵体。

3 回答95 围观

问琼脂糖凝胶电泳实验，胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加吗？做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入的吗

府宅

胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加，一般我们去取胶染料的时候温度就差不多降下来了，不用刻意等，胶凝固了也会影响后面的操作。做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入，电泳槽里的缓冲液全部换掉，防止胶回收时污染。

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问做细胞免疫荧光，最后用共聚焦显微镜观察的时候，出现如图的情况，请问是什么原因造成的呢？

61 围观

问测免疫相关的酶活，怎么准备粗酶液。

txs900416

1 回答108 围观

问小鼠脂肪肝细胞的培养怎么做？

dxy_gwrp7ndq

处死小鼠,无菌分离肝脏,置D-Hanks液中,冲洗肝脏至灰白色,将肝脏剪成1mm×1mm×1mm的组织块,用D-Hanks液洗3次,去掉血细胞,37℃下用0.1%的胰蛋白酶消化10min,倒掉消化液后用D2Hanks液洗2次,培养液洗2次,将肝组织块贴壁于组织培养瓶中,每个培养瓶放组织块30～35块,加少许培养液,将培养瓶倒转置于培养箱中,在37℃、5%CO2条件下培养,3h后补充4ml培养液,并

2 回答104 围观

问动物实验脾脏单个核细胞悬液能存多久在-80中

府宅

－80可保存半年，液氮中保存一年复苏

3 回答216 围观

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