那些利用放射性示踪剂诊断疾病的研究人员和临床医生时刻都在与时间赛跑。这些化合物中放射能的衰减速度是如此之快，往往在几分钟内就已结束了自己的“生命”。现在，科学家研制出了一种新型芯片，能够极大地加速放射性示踪剂的生产，这一进展将促生一批检测和治疗疾病的新型化合物。 依赖放射性示踪剂的医学成像技术的使用在最近几年出现了戏剧性的增长。2005年，全世界完成的大约300万例临床测试都使用了这种技术——正电子发射X线体层照相术（PET），该技术能够追踪从癌症的早期阶段到阿尔茨海默氏症的全部细节。然而尽管PET的解析度很好，但研究人员对它的使用还是受限于这项技术所依赖的放射性化合物的合成和净化时间。当这些化合物进入人体后，它们可能已经消耗了大部分的“生命”，因此使得研究人员无法进行长期分析。 为了解决这一问题，由美国加利福尼亚大学洛杉矶分校的Hsian-Rong Tseng和斯坦福大学的Stephen Quake领导的研究小组研制出一种微流体芯片，该芯片能够完成自动合成最常见的PET探针——名为fluorodeoxyglucose（FDG）——需要的所有化学反应。这种微流体芯片类似于标准微芯片

原位合成适于制造寡核苷酸和寡肽微点阵芯片，具有合成速度快、相对成本低、便于规模化生产等优点。照相平板印刷技术是平板印刷技术与DNA和多肽固相化学合成技术相结合的产物，可以在预设位点按照预定的序列方便快捷地合成大量寡核苷酸或多肽分子。 在生物芯片研制方面享有盛誉的美国Affymetrix公司运用该技术制造大规模集成的Genechip。原位合成后的寡核苷酸或多肽分子与玻片共价连接。它用预先制作的蔽光板和经过修饰的4种碱基，通过光进行活化从而以固相方式合成微点阵。合成前，预先将玻片氨基化，并用光不稳定保护剂将活化的氨基保护起来。聚合用单体分子一端活化另一端受光敏保护剂的保护。选择适当的挡光板使需要聚合的部位透光，不需要发生聚合的位点蔽光。这样，光通过挡光板照射到支持物上，受光部分的氨基解保护，从而与单体分子发生偶联反应。 每次反应在成千上万个位点上添加一个特定的碱基。由于发生反应后的部位依然接受保护剂的保护，所以可以通过控制挡光板透光与蔽光图案以及每次参与反应单体分子的种类，就可以实现在特定位点合成大量预定序列寡核苷酸或寡肽的目的。由于照相平板印刷技术每步的合成效率较低（95%）

摘要： 生物芯片技术是一种新型的生物检测技术，具有平行、快速、自动化等特点。本文着重论述了关于生物芯片的基本概念，主要制作技术及其应用前景。 生物芯片（biochip）技术是生命科学与微电子等学科相互交叉发展起来的一门高新技术，是随着人类基因组计划（human genomic project，HGP）的研究发展应运而生。并使原定于2005年竣工的人类30亿碱基的测序工作，于2003年4月由美、英、日、法、德和中国科学家历经13年的努力提前完成。与此同时，在全人类与SARS病毒的斗争中，生物芯片也得到了应用和发展：2003年4月初，香港大学医学部率先与美国方面借助生物芯片技术准确检验SARS病毒；2003年5月，中国科学家也研制出全面检测SARS病毒全基因组芯片与检测系统，在全球率先研制出第一张冠状病毒全基因芯片。现在，以功能研究为核心的后基因组计划已经悄然走来，为此，研究人员必须设计和利用更为高效的硬软件技术来对如此庞大的基因组及蛋白质组信息进行加工和研究。因此，作为其基本技术手段的生物芯片再次得到了人们的关注。 《生物芯片技术及其应用进展》下载 点击这里下载

摘要： 基因芯片（gene chip）是分子生物学实验技术的一个新突破，利用该技术可以对成千上万个基因的表达进行平行分析。基因芯片技术的出现改变了生物医学研究的前景，是后基因组时代功能基因组研究的主要工具。本文将基因芯片技术在皮肤科学领域研究中的应用进行综述。 随着大量原核和真核生物基因组全序列测序的完成，特别是人类基因组序列的获得，人类已经步入后基因组时代，人们研究的重点由发现基因转向探索基因的功能。但是面对成千上万的基因和蛋白序列分析的数据，常规的研究方法显然不能适应研究的要求，因此必须采用一种高通量的检测技术来解决这一难题，基因芯片技术就是其中之一。基因芯片也称微阵列，是20世纪90年代初期发展起来的一门多学科交叉融合而成的高新技术，它提供了同时检测数千种基因表达水平的方法，现在正广泛应用到生物医药的各个研究领域，成为功能基因组学研究的主要工具。 《基因芯片技术及其在皮肤科学领域研究中的应用》下载 点击这里下载

摘要： 基因芯片是研究生物大分子功能的新技术，目前此技术已经广泛地应用到植物基因组研究中。本文对基因芯片技术在水稻的基因表达检测、特异性相关基因分离、生长发育研究、杂种优势预测、种子纯度检测以及转基因植株检测与鉴定等方面的应用情况进行了详细的综述。 随着人类基因组计划（Human Genome Project）的逐步实施，越来越多的动植物、微生物基因组序列得到测定，基因序列数据库以前所未有的速度迅速增长，生命科学的研究重点也随之由基因序列研究转向基因功能研究。然而，怎样去研究如此众多基因的生物信息及其在生命过程中所担负的功能，如何研究基因与基因之间表达和调控的复杂网络关系，成了全世界生命科学工作者共同面临的课题。进行以上的研究需要能大规模、高通量检测成千上万条基因在各种生理状态下表达全貌的研究手段，基因芯片技术正是迎合了这种转变和需要。在植物的研究中，研究者首先将基因芯片技术广泛地应用到拟南芥中，而水稻作为禾谷类作物分子生物学研究的模式植物，也是世界上最重要的粮食作物，通过对其基因结构及功能的详尽研究，可以更好地理解和认识高等植物的生长和发育过程，不仅能为其它作物的基因组研究建立模型，

摘要： DNA芯片技术是近年迅速发展的一门生物高新技术，其突出特点在于高度并行性、多样性，即能一次性对生物遗传信息进行大规模的快速、同步分析。DNA芯片技术目前已用于基因重复测序、基因表达分析、新基因的发现、基因单核苷酸多态性（SNPs）研究、基因诊断、药物筛选等领域，而且其应用范围还在不断扩展。本室运用这一新技术，检测水稻在受水稻黄单胞菌水稻致病变种及该菌株的rpfC基因缺失突变体感染时基因表达的差异，发现一些基因可能与水稻抗白叶枯病相关。 近年来，兴起了一股DNA芯片技术的热潮，它以其能够快速、高效、大规模地同步检测生物遗传信息的卓越功能而得到迅速发展。在基因测序、基因表达分析、药物筛选、基因诊断等领域显示出重要的理论和实际应用价值。目前，已成为各国科学界及工业界的一个研究热点。本文结合本实验室的经验就DNA芯片技术的概念、发展、原理、技术要点及应用予以综述。 《DNA芯片技术应用研究进展》下载 点击这里下载

【摘要】 基因芯片技术是在化学、分子生物学、计算机科学、微电子学、物理学等多学科交叉的背景下孕育产生的一个高新研究课题，它的产生使传统意义上的化学研究又有了新的应用。为此，作者在本文分析并论述了化学在基因芯片研究中的应用现状和发展前景。 基因芯片（gene chip），又称DNA芯片、寡核苷酸芯片等，这一名词是20世纪80年代初由E. Southern提出来的，最初主要是指分子电子器件，是在化学、分子生物学、计算机科学、微电子学、物理学等多学科交叉的背景下孕育产生的，它涉及到设计、制备、样品处理、杂交、检测以及数据分析等方面，并融合了微电子芯片和生物等多项技术。当前，基因芯片研究已经形成了迅速发展的势头。基因芯片技术是一种建立在杂交测序基本理论上的全新技术，它利用固定在芯片上的几万至数十万条探针与样品进行杂交，来获取大量的信息。它的出现使基因序列测定和功能测定等工作的研究得到了极大的简化，并已经在基因表达分析、基因型判断等领域得到了广泛的应用；在临床上，基因芯片技术在判断疾病的发生、药物的疗效等方面也起着重要的作用。尤其特别的是，它给化学、医学等领域带来全新的变化，随着当前各领域的交叉

摘要： 基因芯片技术作为一种新的技术平台，已广泛地应用于生命科学研究的领域，如基因表达分析、单核苷酸多态性分析、基因突变检测及临床诊断等。随着该技术的不断完善，它将在生命科学研究中发挥越来越重要的作用。就基因芯片技术基本原理、分类、检测过程、存在的问题、研究进展和应用作一介绍。 前言 随着人类基因组计划（human genome project，HGP）的完成，大量的核苷酸序列呈现在人们面前，此时研究特定条件下基因是如何表达的以及各个基因的功能是人们面临的又一挑战。用传统的方法进行这项工作将耗费大量的人力、物力。而基因芯片技术因具有高度并行性、高通量、微型化和自动化的特点，将是进行这项研究的最有力工具。基因芯片（gene chip）又称DNA芯片（DNA chip），是指在面积不大的基片表面有序地固定大量的基因探针（gene probe），从而形成的DNA 微阵列。芯片上每一特定位置的核苷酸序列都是已知的，杂交后根据各点产生的荧光信号强弱，利用激光共聚焦扫描和电荷耦合器件（CCD）成像等方法对杂交结果进行检测，从而实现样品的分析。 《基因芯片及其应用》下载 点击这里下载

1、临床疾病诊断 基因芯片在感染性疾病、遗传性疾病和肿瘤等疾病的临床诊断方面具有独特的优势。与传统检测方法相比，它可以在一张芯片同时对多个病人进行多种疾病的检测；无需机体免疫应答反应，能及早诊断，待测样品用量小；能检测病原微生物的耐药性，病原微生物的亚型；极高的灵敏度和可靠性；检测成本低，自动化程度高，利于大规模推广应用。这些特点使得医务人员在短时间内，可以掌握大量的疾病诊断信息，这些信息有助于医生在短时间内找到正确的治疗措施。 2、药物筛选和新药开发 芯片技术具有高通量、大规模、平行性等特点可以进行新药的筛选，尤其对我国传统的中药有效成分进行筛选。目前，国外几乎所有的主要制药公司都不同程度地采用了基因芯片技术来寻找药物靶标，查检药物的毒性或副作用，用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间，在基因组药学（pharmacogenomics）领域带动新药的研究和开发。 3、基因功能研究 在基因组学和后基因组学研究中，基因芯片也起到重要的作用。应用基因芯片可以开展DNA测序、基因表达检测、基因突变性、基因功能研究、寻找新基因、单核苷酸多态性（SNP）测定等研究。与

基因芯片技术充分利用生物科学、信息学等前沿学科的先进成果，以其快速、自动化程度高的特点而广泛应用于医学科研的各个领域，为后基因组时代的生命科学研究提供了一种强有力的工具。北京中医药大学东直门医院裴晓华博士指出，将基因芯片技术运用于中医外科前景广阔。他主要介绍了基因芯片技术在以下几个方面的应用。 外科感染 随着越来越多的病毒、支原体、衣原体和细菌的整个基因组测序的完成，就可以大量制备含有病原体基因的芯片，用于病原体的快速诊断，而且送检标本无需进行培养。常见的外科感染中，有的细菌极难培养，有的细菌分离培养所需时间太长，给临床细菌学检验带来困难，使用基因芯片可以解决面临的难题。标本经处理后，利用通用的核酸扩增技术将样品核酸进行荧光标记，然后与基因芯片上已知的细菌探针阵列进行杂交；经扫描后就可以判断出是哪一种细菌的感染。由于基因芯片可以包含的信息非常多，可以集中多达几千种探针信息，而临床常见的细菌感染也不过几十种，所以基因芯片能够轻松应付这种任务。 脓毒症是外科面临的棘手问题，与中医外科的“内陷”、“走黄”类似。尽管已有强有力的抗生素的应用，但脓毒症仍是呼吸衰竭、多脏器功能障碍以及危重病人死亡

该过程指将从生物样品分离到的蛋白、DNA或RNA样品与生物芯片进行反应，从固定于芯片的探针阵列得到样品的序列信息。由于玻片本身的荧光本底很低，所以可用荧光标记的方法来对生物芯片实施检测和分析，同时具有快速、精确和安全等优点。而且，还可用多个荧光素进行标记以实现一次性分析多个生物样品。玻片作为支持物还可使反应体积缩小到5～200μl，而通常的杂交反应体积为5～50ml。这样一方面节约了试剂，同时还可以提高反应试剂的有效浓度（0.1～1μm），是常规检测（0.4～4pM）的一万倍。因此促进了杂交速度减少了杂交时间，并可取得较强的荧光信号。 样品的制备 ①核酸样品 RNA样品通常需要首先逆转录成cDNA并进行标记后才可进行检测。目前，由于检测灵敏度所限，尚难以普通探针对极少量的核酸分子进行杂交和检测，所以需要对样品或后续测试信号进行适当的放大。多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程度的扩增，例如通过PCR方法，以使样品核酸的拷贝数有所提高达到检测的灵敏度。但用DNA芯片进行检测分析时需要对样品大量的DNA片段进行扩增和标记，所以需要同时对样品核酸分子大量的区域进行扩增，这是一项工作量非常

一、核酸样品 RNA样品通常需要首先逆转录成cDNA并进行标记后才可进行检测。目前，由于检测灵敏度所限，尚难以普通探针对极少量的核酸分子进行杂交和检测，所以需要对样品或后续测试信号进行适当的放大。多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程度的扩增，例如通过PCR方法，以使样品核酸的拷贝数有所提高达到检测的灵敏度。但用DNA芯片进行检测分析时需要对样品大量的DNA片段进行扩增和标记,所以需要同时对样品核酸分子大量的区域进行扩增，这是一项工作量非常巨大的工作。顺应这一要求出现了许多解决办法，并在不同程度上减轻了工作量。例如，Mosaic Technologies公司引入的固相PCR方法，将多对引物固定于支持物上（其位置和序列信息预定），以类似于原位PCR的方式一次性对样品多个片段进行扩增和放大，而且不会由于引物种类过多而出现相互间的竞争和抑制（这种情况曾出现于多重PCR中）。引物具有较强的特异性，扩增反应也不存在交叉污染，因而省略了处理常规多重和多个PCR反应的繁琐工作。再如，Lynx Therapeutics公司引入的大规模并行克隆（massively parallel solid-ph

2001年，Schultz小组通过联合使用PNA(肽核酸)标记的小分子和DNA地址芯片技术而发展了新的小分子芯片(Angew.Chem.Int.Ed.Eng.2001，40， 3152-3155)。十年前就发展了单珠单分子下的编码和解码法, 但是给标记合成编码需要额外的化学修正, 而且由于珠子的体积合成化合物的量受到限制。 在新方法中， PNA是编码标记, 带有标记的文库化合物直接与芯片上对应的DNA序列相关联。 结果是，PNA和DNA形成双螺旋， 小分子文库化合物露在双链的顶端。 通过对芯片上特定地址解码来识别化合物。 实验使用的例子是 cyctein蛋白酶抑制剂, 证明了PNA标记不干扰抑制剂的活性。 然而， 这些以PNA标记的分子将不能穿透细胞膜, 这对于以细胞为基础的筛选可能不太合适。 许多公司宣称他们具有小分子芯片技术， 但是他们大部份是为高通量筛选准备的小圆片或薄膜排列。 一家德国的新诞生的公司， Graffinity，才是真的用共价键将小分子附到芯片表面，并以蛋白质键筛选。 他们合成含硫末端的小分子然后利用S与Au间的强键将这些分子连到金的表面。 利用Biacore

狭义的生物芯片是将生物分子（寡聚核苷酸、cD-NA、基因组DNA、多肽、抗原、抗体等）固定于硅片、玻璃片、塑料片、凝胶、尼龙膜等固相介质上形成的生物分子点阵。在待分析样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后，利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析。在此基础上发展的微流体芯片，则是将整个生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白质及其他生物成分进行高通量检测，它是将生命科学究中所涉及的许多分析步骤，利用微电子、微机械、化学、物理技术、传感器技术、计算机技术，使样品检测、分析过程连续化、集成化、微型化。 目前应用最广泛的生物芯片是基因芯片（Gene Chip, DNA Chip, DNA Microarray）。基因芯片是基因突变分析、基因测序、基因表达研究中的高效手段之一。基因芯片的制作通常采用原位合成或合成后点样的方法。在基因芯片中基因表达谱芯片的应用最为广泛，这种芯片可以检测整个基因组内的成千上万个，甚至数万个基因在mRNA表达水平的变化，但对芯片点阵的密度要求较高，目前由Affymetrix公司研制的基因表达谱芯片的点阵数可高达400

制作芯片和获得芯片的数据有许多不同的方法。这里我们介绍了在学术领域中两种芯片的构建和使用。除了详细说明了技术细节外，我们还对组成和方法的优缺点进行了评论，同时还介绍了杂交的方法。用我们所建立和使用芯片的方法来回答生物领域问题的事实证明了这种技术在大学的环境下是可行的。 一种获得基因功能信息的高通量的方法是cDNA芯片。在一块显微镜载玻片上包含了几百至几千个固定的DNA样本，以类似于Northern blot 和 Southern blot的方法进行杂交。了解了这个方法后，我们决定在我们各自的实验室Pennsylvania大学（Penn）和Albert Einstein学院医学部（AECOM）制作了高速，高精度的芯片。这个设备是由Stanford医学院Pat Brown制造的，第一次论证了这个方法的可行性。我们的目标是（1）最终以合理的价格，用一块或几块芯片来检测哺乳动物细胞中每个基因的表达，（2）发展以芯片为基础的绘图方法，（3）兼顾硬件和超作方法，尽可能地提高灵敏度。 玻片的优势 一个理想化的支持物允许探针有效地固定在其表面，探针与目标分子能牢固地杂交结合。与另一种用于制作芯片的标准

生物芯片在药物分析中的应用主要是指采用毛细管电泳芯片/质谱系统对化合物库、血样和尿样中的药物进行分析鉴定。毛细管电泳芯片/贡谱系统是指将毛细管电泳芯片和质谱联用的一套装置。毛细管电泳芯片进行样品的分离，而与芯片联用的质谱则有选择性的对分离成分进行检测。美国康奈尔大学的Wachs等发明了一种微型化的离子喷雾装置。这种装置适合于与基于芯片的分离装置、多孔板或带有待测样品残渣的表面联用。这种装置有两种版本，一种称为微型喷雾器，主要与毛细管电泳芯片联用；另一种称为小型喷雾器，它带有伸长的吸样毛细管，可以插入多孔板孔的底部，所以适合与多孔板联用。这种装置可以帮助人们对芯片分离所得样品或多孔板中样品进行质谱检测。来自康奈尔大学同一个实验室的Deng等将玻璃制成的毛细管电泳芯片与他们自己设计的微型离子喷雾装置连接，使用PE公司的质谱系统做检测，对多种药物的标准和血浆样品进行了分析检测。实验结果证明，使用毛细管电泳芯片/质谱系统对小分子化合物进行快速（30s）的检测是可行的。这套装置可以用来对合成的化合物库和人血浆中重要成分进行分析检测。Ramseier等用芯片毛细管电泳和使胶毛细管电泳检测尿中苯丙胺

对药物进行毒性评价，是药物筛选过程中十分重要的一个环节。现在毒理学家多采用鼠为模型通过动物实验来确定药物的潜在毒性。这些方法需要使用大剂量的药物，花上几年时间，花费巨大。 DNA芯片技术可将药物毒性与基因表达特征联系起来，通过基因表达分析便可确定药物毒性，使得药物毒性或不期望出现的效应在临床实验前得以确认。用DNA芯片可以在一个实验中同时对成千上万个基因的表达情况进行分析，为研究化学或药物分子对生物系统的作用提供全新的线索。该技术可对单个或多个有害物质进行分析，确定化学物质在低剂量条件下的毒性，分析、推断有毒物质对不同生物的毒性可比性。如果不同类型的有毒物质所对应的基因表达诺有特征性的规律，那么，通过比较对照样品和有毒物质的基因表达谱，便可对各种不同的有毒物质进行分类，在此基础上通过进一步建立合适的生物模型系统，便可通过基因表达港变化来反映药物对人体的毒性。 已经有不少研究工作表明，利用DNA芯片预测化合物毒性和对毒性物质进行分类是可行的。 Waring等用15种已知的肝毒性化合物处理大鼠。这些毒物将对肝细胞造成多种伤害，如DNA 损伤、肝硬化、肝坏死和诱发肝癌等。从大鼠肝脏中提取RN

1 DNA方阵的构建 选择硅片、玻璃片、瓷片或聚丙烯膜、尼龙膜等支持物，并作相应处理，然后采用光导化学合成和照相平板印刷技术可在硅片等表面合成寡核苷酸探针，或者通过液相化学合成寡核苷酸链探针，或PCR技术扩增基因序列，再纯化、定量分析，由阵列复制器（arraying and replicating device ARD），或阵列机（arrayer）及电脑控制的机器人，准确、快速地将不同探针样品定量点样于带正电荷的尼龙膜或硅片等相应位置上，再由紫外线交联固定后即得到DNA微阵列或芯片。 2 样品DNA或mRNA的准备 从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须进行扩增提高阅读灵敏度。Mosaic Technologies公司发展了一种固相PCR系统，好于传统PCR技术，他们在靶DNA上设计一对双向引物，将其排列在丙烯酰胺薄膜上，这种方法无交叉污染且省去液相处理的繁锁；Lynx Therapeutics公司提出另一个革新的方法，即大规模平行固相克隆（massively parallel solid-phase cloning）这个方法可以对一个样品中数以万计的DNA

用于病毒免疫标志物的平行检测与血清学分型 目前已发现数十种病毒可引起肝炎性损害，检测其相应的免疫标志物在人体中的存在及含量，对病因诊断与治疗意义重大。最新发展的蛋白质芯片技术原理类似于常规的酶联免疫反应原理，即将特异性抗原或抗体固定于载体，待测样本按比例稀释后与其上的抗原或抗体进行反应，在加上荧光标记的抗原或抗体，用计算机软件对荧光信号进行分析，即可获得准确的定性或定量结果。一张芯片上可分布上千甚至数万个抗原或抗体，并能标记多种载光素，使之能同时倍快速检测，且可进行病毒的血清学分型。 用于肝炎病毒的分类、分型、变异和定量检测 为遴选抗病毒药物，评价临床疗效，除生化、免疫和病理指标外，还应明确病毒的核酸结构和体液病毒核酸的含量，用DNA测序、PCR等法虽可达到目的，但技术难度和实验成本限制了其应用。基因芯片则可对所有的肝炎病毒的分型、变异、突变和病毒核酸含量进行高通量、平行检测。它将待测病毒基因（DNA或是mRNA）经体外转录、PCR、逆转录、末端标记等处理成标记有荧光分子的核酸分子，然后与芯片上的探针进行杂交，用计算机对杂交信号进行处理，依信号和强度即可得出核酸含量。这一方法简便易行，

通常的生物化学反应过程包括三步，即样品的制备，生化反应、结果的检测和分析。可将这三步不同步骤集成为不同用途的生物芯片，所以据此可将生物芯片分为不同的类型。例如用于样品制备的生物芯片，生化反应生物芯片及各种检测用生物芯片等。现在，已经有不少的研究人员试图将整个生化检测分析过程缩微到芯片上，形成所谓的"芯片实验室"(Lab-on-chip)。"芯片实验室"通过微细加工工艺制作的微滤器、微反应器、微泵、微阀门、微电极等以实现对生物样品从制备、生化反应到检测和分析的全过程，从而极大地缩短的检测和分析时间，节省了实验材料。 样品制备芯片的目的是将通常需要在实验室进行的多个操作步骤集成于微芯片上。目前，样品制备芯片主要通过升温、变压脉冲以及化学裂解等方式对细胞进行破碎，通过微滤器、介电电泳等手段实现生物大分子的分离。 　 生化反应芯片即在芯片上完成生物化学反应。与传统生化反应过程的区别主要在于它可以高效、快速地完成生物化学反应。例如，在芯片上进行PCR反应，可以节约实验试剂，提高反应速度，并可完成多个片段的扩增反应。当前，由于检测和分析的灵敏度所限，通常在对微量核酸样品进行检测时必需事先对其进行