细胞色素P450（cytochromeP450或CYP450，简称CYP450）为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。 细胞中，细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上，作为一种末端加氧酶，参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来，对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。最新研究表明细胞色素P450还是药物代谢过程中的关键酶，而且对细胞因子和体温调节都有重要影响。 CYP参与药物代谢的总反应式可用式表达： DH+NADPH+[H+]+O2→DOH+H2O+[NADP+] 含铁离子的P450与药物分子结合，接受从NADPH—P450还原酶传递来的一个电子，使铁转变为二价亚铁离子；随之与一分子氧、一个质子、第二个电子结合，形成Fe2+OOH●DH复合物，它与另一个质子结合，产生水和铁氧复合物（FeO）3+●DH。（FeO）3+●与氢原子（来自DH）分离，形成一对短暂的自由基，氧化型药物从复合物中释放，P450酶再生。 CYP

概述 大戟科植物一叶秋（Securinega suffruticosa (Pall) Rehd）也称叶底珠，别名狗杏条，我国资源十分丰富。其根、叶和嫩枝中均含有多种生物碱，结构已经清楚的有十几种。其中一叶秋碱含量最高，并已用于临床。一叶秋碱和它的衍生物能兴奋中枢X神经，增强心肌收缩，升高血压，临床用硝酸一叶秋碱治疗面神经麻痹，小儿麻痹骶神经炎和股外侧神经炎感染引起的多发性神经炎，成为神经科疾患的常见药物。 一叶秋碱味淡黄色棱形晶体，难溶于水，易溶于醇、氯仿、较难溶于石油醚，其结构如下： 实验目的、要求 1． 目的 通过一叶秋碱的提取分离掌握用离子交换树脂法提取分离生物碱的原理和方法。 2． 要求 分离得到纯的一叶秋碱，并制备其衍生物，加以鉴定。 试验方法 1． 提取分离方法（见下图） 2． 生物碱的定性实验 ① 取渗漉液1ml，加硅钨酸试剂数滴，产生淡黄色沉淀。 ② 取渗漉液1ml，加碘化钾试剂数滴，产生淡棕褐色沉淀。 ③ 取渗漉液1ml，加碘化铋钾试剂数滴，产生棕红色沉淀。 3． 一叶秋碱衍生

蛋白聚集严重影响以蛋白为基础研发的药物。在药物制剂中，蛋白聚集在生物活性和免疫原性方面影响药效。蛋白聚集发生在生产过程的各个阶段包括细胞培养、纯化、生产、储存、运输等方面。制药工业希望在生物工艺中找到新的方法，可用于检测、追踪、定量分析影响蛋白聚集的因素。 近年来以冻干稳定形式存在的蛋白聚集体作为标准品，可以准确地定量检测蛋白聚集，加上新颖的只需在酶标仪里即可实验的ProteoStat® protein aggregation assay，可对蛋白检测方法进行优化。在这篇文章中，使用已知浓度的聚集IgG标准品作为标准曲线，通过ProteoStat®protein aggregation assay/standards对IgG的聚集水平进行检测，集中分析了制药工业中常见的3种聚集形式：热诱导聚集、机械诱导聚集、冷冻和反复冻融诱导聚集。 材料和方法 ProteoStat protein aggregation assay 和ProteoStat protein aggregation standards(购自Enzo )，利用荧光分子信号染料可特异性结合聚集

实验原理 以鸡蛋清异种蛋白质注入大白鼠足内，可引起急性类症，使局部组织肿胀。通过测量实验前、后大白鼠足跖和踝关节的周长变化来观察秦艽的抗炎作用。秦艽的抗炎有效成份主要是秦艽碱甲等生物碱。 实验器材 天平、鼠笼、软塑料尺、注射器、剪刀。 药品 秦艽水煎醇沉液1g/ml、生理盐水、5mg/ml地塞米松注射液、10%蛋清溶液、苦味酸液。 动物 大白鼠（150~200克） 方法 取大白鼠3只，称重，用苦味酸标记。将大白鼠右后肢拉直，用软塑料尺分别量取足跖或踝关节的周长，连测两次，其平均值为用药前的周长。 给动物分别腹腔注射以下药物：甲鼠给生理盐水，乙鼠给秦艽水煎醇沉液，剂量均为0.6~0.8ml/100g，30min后在每鼠右后肢足掌远端进针至踝关节附近，皮下注射10%蛋清溶液0.1ml。之后于0.5、1.0、1.5和2h分别测量鼠跖或踝关节的周长。 综合全实验室结果，按下式算出各药在不同时间内的是肿抑制率： 注意 （1）用软尺量关节周长，应由专人来操作。 （2）测量足跖或踝关节周

一、E.coli/phage 裂解液预吸附血清 1. 将E.coli /phage lysate 以1:10-20 稀释在TBST 溶液中。 2. 将4 张82mm 的nitrocellulose membranes（NC）浸入稀释后的E.coli/ phagelysate 中，室温下水平摇动30 分钟，取出NC 并使膜沥干。 3. 用50ml TBST 溶液洗膜3 次，每次10 分钟。 4. 用滤纸轻轻吸去膜上的液体。 5. 将膜放入50ml 封闭液中，室温下水平摇动最少30 分钟。 6. 将膜从封闭液中取出，用50ml TBST 溶液洗膜3 次，每次10 分钟。 7. 将血清按1:5 稀释在TBST 溶液中，将一张膜放入溶液中，37℃下轻轻水平摇动10 分钟。 8. 从血清稀释液中取出膜并丢弃,加入另外一张新膜,37℃下轻水平摇10 分钟. 9. 重复步骤8，直至所有4 张膜都处理完。 10. 除去最后一张膜，收集血清（prima ry antibody），分

摘要：本文采用GC、GC/MS技术对口服Selegiline Hydrochloride，一种单胺氧化酶抑制剂的尿中代谢物进行分析测定，确认检出10种代谢产物，其中三种为新检测到的羟基化代谢物。 1.尿样收集 健康男性(体重65 Kg)口服单次剂量10mg Selegiline 5片剂。分别收集所排各次尿液的全部及服药前的空白尿，于-20℃。 2.样品制备 取尿样5 ml，加入100 mg L-半胱氨酸，0.5 ml浓HCl，于100℃下水解30 min。冷却后以3 ml叔丁基甲醚提取，分离，弃去醚层。于水相加0.5 ml12M NaOH，2 g固体缓冲剂(NaHCO3：K2CO3=3：2，pH9.6)。以3 ml含二苯胺为内标的叔丁基甲醚/异丙醇( 9:1)溶液， 振摇。分离提取液，于N2气下吹干， 以 1 ml乙酸乙酯溶解残渣，GC/NPD进样2 L。之后于N2气下浓缩至约50 L。于GC/MSD进样2 L。然后吹干，于残渣中加入100 L乙酸乙酯和100 L三氟乙酰酐(TFAA)，70℃反应20 min。于N2气下吹干，再以100 L乙酸乙酯溶

摘要：研究用芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测系统分离测定经7-chloro-4-nitrobenzo-2-oax-1，3-diazole(NBD-Cl)衍生的麻黄碱和伪麻黄碱的实验条件。采用胶束毛细管电动色谱分离体系(12 mmol/L SDS+10 mmol/L硼砂缓冲液,pH9.0)，在45 mm长的通道上实现了麻黄碱和伪麻黄碱的快速分离，一次分离小于1.5min。10～100 mg/L范围内,峰高与浓度呈良好的线性关系，麻黄碱、伪麻黄碱的检出限分别是0.83 mg/L和1.10 mg/L。所建立的方法应用于尿中麻黄碱和伪麻黄碱的分离测定，取得满意的结果。 1.芯片的制作 十字通道玻璃芯片参照文献[7]的方法制备。分离通道总长45 mm(有效长度38 mm)，进样通道总长10 mm，通道顶宽50 μm，深15 μm。 2.尿样预处理　 取5 mL尿样于20 mL离心管，加入2 mL乙醚和1 g无水Na2SO4，振荡5 min后离心分离。移取上层有机相于2 mL离心管，用N2吹干，加100 μL水溶解残留物。所得溶液按3节衍生。 3.待测

摘要：应用气相色谱-质谱(GC-MS) 联用技术建立动物组织中β2-兴奋剂的测定方法。动物组织加1%的高氯酸溶液匀浆，用乙酸乙酯：异丙醇(6∶4)萃取，经固相萃取柱净化，BSTFA+1% TMCS衍生后进行GC-MS 测定。样品中最低检出浓度分别为特布他林0.5μg/kg、克伦特罗110 μg/kg、沙丁胺醇0.2 μg/kg。 1.色谱条件 色谱柱：HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱( 30m ×0.25mm ×0.25 μm)；进样口温度：300℃；柱温程序：初温150℃，保持3 min，然后以10℃/min 升至240℃，保持1 min ，再以20℃/min 升至 280℃，保持3 min；载气：高纯氦气 (99.999 %)，流速110 ml/min，不分流进样。 2.质谱条件 EI 源，源温230℃；电子能量70 eV；接口温度280℃，电子倍增器电压1388 V，质谱扫描范围50～550amu；溶剂延迟：8 min。 3.样品

在免疫酶技术中，有时需要将样品液（如抗原、抗体、酶、酶标抗体或酶标抗原）浓缩。 常用的浓缩技术如下： 1.反透析法 如果在装有样品液的透析袋周围放上浓度很高的且具有吸水作用的多聚物或蔗糖，由于膜内渗透压比膜外低，膜内样品液中的蛋白质进行浓缩。常用的多聚物有聚乙烯吡咯酮（Polyvinylpyrrolidone,简称PVP，分子量约12000）、聚乙二醇（Polyethylene glycol,简称PEG,亦称Carbowax,分子量约6000，但PEG的分子量在5000－10000均可用），吸水剂不一定用干剂，可用30%的浓溶液，吸水更快。PEG浓溶液中常加入碱液以中和酸性。吸水剂用后可通过加温或吹风进行回收。PVP和PEG浓缩效果好，但是，小分子量聚合体易进入膜内，并且PVP对在280nm波长处的紫外光有吸收作用。由于蔗糖易进入膜内，因此，要求蔗糖必须高纯度，并且对下一步工作（例如免疫动物）无影响。蔗糖的优点是来源方便，但会因分子量小而影响浓缩效果。 2.凝胶吸水法 凝胶例如葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶是具有一定孔径的微孔和吸水性能的多聚物颗粒，在蛋白样品液中加入孔径较小的凝

溶脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。 【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶，使分糖产氨，培养液呈碱性，指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮，使含有精氨酸肉汤培养液呈碱性而呈粉红色。 【材料】支原体分离鉴定培养液。 【标本采集】标本采集后应立即送检，室温保存不超过2小时，2—8℃保存不超过5小时。 男性：用男性无菌拭子插入尿道口内2—4cm处轻轻旋转取分泌物；也可取前列腺液或精液培养。必要时也可用尿液作支原体培养，取清晨第1次尿的中段尿10—20ml，经2000rpm离心10分钟，取沉渣接种，但尿液支原体培养阳性率明显低于尿道分泌物。 女性：用扩阴器扩阴后，用女性拭子在宫颈口内1—2cm处轻轻旋转取宫颈分泌物；也可用羊水培养。不推荐用尿液。 【培养】 1、培养管复温取出所需要数量的培养管，复温至室温，作好标记。 2、接种将拭子插入培养管，旋转并挤压数次，使拭子中支原体渗入液体中，拭子经灭菌处理后妥善处理；尿液沉渣

中医“证”的模型是在动物身上复制临床不同的症候，以不同的证型表现出来。 一、阳虚模型 肌注醋酸氢化考的松，口服地巴唑，羟基脲或手术切除双侧肾上腺。 二、阴虚模型 喂饲甲状腺片、皮下注射L-甲状腺素钠盐，人工高位小肠侧瘘手术。 三、脾虚模型 喂饲含大黄、玄明粉、番泻叶的低蛋白饮食，或皮下注射利血平。 四、寒证模型 三联疫苗腹腔注射，口服寒凉泻。 五、热证模型 口服或注射温热药。 六、里实证模型 强毒细菌注入狗阑尾肌层。 七、血瘀模型 皮下注射10%高分子右旋糖酐，家兔剂量1.5g/kg；家兔静脉注射10%葡聚糖生理盐水，5ml/kg体重；大鼠皮下注射0.1肾上腺素0.2ml/次，日2次，加水刺激5分钟处置1～2日。 八、血虚模型 于实验第1、4、7天皮下注射2%乙酰基苯肼生理盐水溶液，每100g体重第1次注1ml，第2、3次注0.5ml。小鼠隔日1次放血，共7次，放血量每次量为总血量的20%，以后各次均为0.5ml，限食。 九、肝郁模型 选用大鼠，以艾叶注射液2ml (含生药2.0g)，腹腔注射，每日1次，半月后

A. 裂解液 (lysis solution) (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml) Final concentration Amount Urea(Fw 60.06) 8M 19.2g CHAPS 4%(w/v) 1.6g Pharmalyte3-10 2% 800μl Double distilled H2O To 40ml 新鲜配制或者分装贮存于-20℃ ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。 ② 其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离

动物疾病模型的复制，是用人为的方法，使动物在一定的致病因素（物理的、化学的、生物的）作用下，造成动物组织、器官或全身一定损害，出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病，通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律，为研究人类疾病的预防、治疗（包括新药物试用）提供理论依据。所以动物疾病模型的复制，在医学科学研究中占有十分重要的地位。 目前我国生物医学科学研究中，动物疾病模型主要用于三个方面：即实验生物学、实验病理学和实验治疗学（新药筛选亦属于实验治疗学范畴）。由于研究目的不同，对于疾病模型的要求也有所区别。如实验病理学，它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病。整个疾病复制过程，就是它的研究内容，目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原。而实验治疗学则完全不同，疾病的复制仅是它研究的开始，因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中，某些治疗措施或药物的疗效如何。 诱发性动物模型的复制方法不外是用生物的、物理的、化学的和各种环境因子作用于动物而产生。 生物学因素包括细菌、病毒、寄生虫、细胞、生物毒素、激素等各种致病原，通过接种而使正常动物发生

材料： 1. 缓冲液和溶液：氯仿；NaCl（固体）；聚乙二醇（PEG 8000）；SM 2. 酶和缓冲液：胰Dnase I (1mg/ml)；胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6） 3. 离心机和转子：Sorvall GSA 转子或相当型号 4. 专用设备：量筒（2L） 5. 载体和菌株：大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解 方法： 用PEG沉淀噬菌体颗粒： 1、 将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温，加胰Dnase I和Dnase 至终浓度约为1µ g/ml，室温温育30min。 2、 每500ml培养物加入29.2固体NaCl（终浓度为1mon/L），搅拌使其溶解。将培养物冰浴1h。 3、 4℃，11000g（8300r/min于Sorvall GSA转子中）离心10min以去除细胞碎片，将四份培养物的上清混合置于2L的干净量筒中。 4、 测定所收集上清的总体积，然后转移至2L的烧瓶中，加固体PEG至终浓度为10%（m/V，加500ml上清加50gPEG），于室温用磁力搅拌器慢慢搅拌溶解PEG。 5、

一、在细胞及分子生物学中的应用 1. 细胞、组织的三维观察和定量测量 共聚焦显微镜的分辨率超过普通光学显微镜，染色过程简便，可以在活细胞上进行无创伤性的染色，最大程度地维持细胞的正常形态。多种自发性的荧光染料，已被广泛地用于诸如RNA、DNA细胞核、线粒体、内质网、肌动蛋白、细胞膜等结构的标记。运用免疫荧光技术，将不同波长的两三种荧光物质标记在内部不同结构的相应抗体上，以这几种荧光物质特定的光谱特性选择激发光和滤光片，则可以观察到细胞内部各结构间的毗邻关系。特别是在荧光着丝点易被遮盖（如荧光原位杂交实验）的情况下，这种三维图像的多角度观察提供了极大的优越性。 细胞有丝分裂中细胞核内染色体数目（双倍体、多倍体）、形态和位置的变化，一直是细胞生物学肿瘤研究中的热点。着丝点是细胞核内的重要结构，被认为在有丝分裂中起重要的作用，应用共聚焦显微镜的定量测量技术，可以较精确地测定着丝点在不同分裂期的位置。 共聚焦显微镜生成厚度小于0.2微米的依次相连的光学切片，即使较厚的组织的三维数据也可被计算机获取，运用适当的图像分析软件，可以测量并确定所观察结构的表面特征，体积等参数，为相互结

今年初，赛默飞世尔科技将芬兰Finnzymes公司收归旗下。为啥？看中的就是它丰富的PCR产品线，包括DNA聚合酶、迷你PCR仪、新型超薄壁PCR管和超薄壁PCR板等等。 Phusion® DNA 聚合酶 是Finnzymes的拳头产品，它所提供的PCR性能是其它DNA聚合酶无法比拟的。它的主要特点可用四个词概括：超保真、超快速、超强劲、超特异。 这些是如何实现的呢？大家都知道，结构决定功能，那我们先来看看它的结构（下图）。双链DNA结合蛋白（紫色）与一种新型的具有校对功能的类热球菌酶（绿色）融合，形成了一种独特的高性能聚合酶——Phusion® DNA聚合酶。 双链DNA结合蛋白的存在提高了聚合酶对双链DNA的亲和力，使得每次酶与双链发生结合反应时都能够掺入更多的核苷酸，并减少了链延伸所需的结合反应次数。Phusion® DNA聚合酶的处理能力大约是Pfu DNA聚合酶的10倍，是Taq DNA聚合酶的2倍。这种强大的处理能力不仅缩短了延伸时间，而且提高了酶的扩增性能，使其能够在更短的时间里扩增更长的模板。另外，与传统的具有校对功能的聚合酶相比，Phusion® DNA聚合

基因学现在已经成为了一个国际化的研究话题，在很多国家的科技话题中都频频出现，美国杜克大学基因科学与政策研究所（IGSP）的研究人员称，用单个基因改造多年生牧草，可使其根部更加坚韧，生长更快，这有利于生物燃料的制造。 多年生牧草包括柳枝稷和芒草等。美国曾经提出了在2012年以前从玉米、柳枝稷等可再生作物中提取燃料乙醇的计划。柳枝稷之前一直被认为是非常有前途的乙醇原料，因为它是多年生植物，而玉米需要每年再植。不过，大多数生物燃料作物需要等到种植两三年后收割，而且需要固定其根部，改进根部生长能大大减少收割时间。 IGSP系统生物学研究中心的主任、生物学家菲利普·本菲尼做到了这一点。他们采用了一种基因组方法，旨在找出一些特定的基因--当细胞停止分裂并开始表现出其最终会变成成熟细胞的特征时，这些基因会变得活跃。最终，他们找到了一种名为UPB1的基因，进一步的研究显示，UPB1可控制过氧化物酶的基因表达。 他们接着证明，过氧化物酶控制细胞繁殖区域和细胞延长区域（细胞分裂从此处开始）之间自由基的平衡。自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞，进而引

突触是神经细胞间信息传递的关键部位，信号从一个神经元传递到另一个神经元需要通过突触这一“关卡”。神经元的膜电位和兴奋性对于调节其功能起十分重要的作用。神经元消耗能量，通过钠‐钾泵（Na+，K+‐ATPase，NKA）在细胞浆中浓集钾离子并排出细胞内的钠离子，从而维持细胞膜内外的钠、钾离子浓度梯度，调控神经元的膜电位和兴奋性。既往研究证实ATP、钠和钾离子可以调节钠‐钾泵的功能以及一些神经递质、激素通过它们的受体间接地调节钠‐钾泵活性，还发现哇巴因（ouabain）以及地高辛可以直接抑制钠‐钾泵活性；然而，人体内是否存在钠‐钾泵的内源性的激动剂还不清楚。 近日，中科院上海生科院神经所张旭实验室通过对背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）的研究，发现在 DRG 中有一种选择性高表达的蛋白——滤泡素抑制素样蛋白 1（Follistatin‐like 1，FSTL1）能通过清亮小泡运输至脊髓内的传入神经末端释放，并直接与传入神经末端突触前膜上的钠‐钾泵 α1 亚基相结合，增强钠‐钾泵活性，使细胞膜超极化，从而对传入神经末端的兴奋性突触传递起抑制作用。这一研究发现

— 2011 第二届全国体外诊断产业高峰论坛现场纪实 体外诊断产业（In Vitro Diagnostics，IVD），涵盖体外诊断试剂以及相关配套的诊断仪器。体外诊断产品在疾病早期发现，疾病预防、诊断、治疗以及健康体检中发挥着重要的作用。 2010年，全球体外诊断市场总额约为445亿美元，其中发达世界的年增长率为3-6%，新兴市场的年增长率为10-20%。中国的体外诊断市场发展迅速，年增长率为15-18%，当前的市场规模为20亿左右，占据全球3%的份额，其中50%的市场被全球十强企业所占据。《国家中长期科学和技术发展规划（2006-2020）》明确将诊断产业发展列为重点领域。中国民族IVD企业面临着诸如企业规模幼小、产品结构单一、系统性差、溯源性差等诸多问题。基于以上问题，2011年3月22日-3月23日，一年一度的全国体外诊断产业高峰论坛在上海银星皇冠假日酒店隆重召开。本次会议作为2011年全国体外诊断行业市场发展、技术更新的方向标，吸引了众多业内知名的生产企业、经营企业、三甲医院检验科/病理科以及优质代理商的参与。卫生部临床检验中心临床免疫室主任李金明先生、中生北控董

科普文章科学名词 生命科学（life sciences） 当人们真正进入到生命科学的范围之后，他会发现，一切是那样地令人激动和富有魅力，从而不由自主地被吸引着一步一步地去深入地探索生命的奥秘。对于生命的研究在改善人类的状态方面有着显著的作用，比如古诗说“人生七十古来稀”，如今是“人生八十不稀奇”，又比如粮食亩产量近十余年里成倍增长，许多悲观学者所预言的“人类大饥荒”并没有出现。 　　生命科学是系统地阐述与生命特性有关的重大课题的科学。支配着无生命世界的物理和化学定律同样也适用于生命世界，无须赋于生活物质一种神秘的活力。对于生命科学的深入了解，无疑也能促进物理、化学等人类其它知识领域的发展。比如生命科学中一个世纪性的难题是“智力从何而来？”我们对单一神经元的活动了如指掌，但对数以百亿计的神经元组合成大脑后如何产生出智力却一无所知。可以说对人类智力的最大挑战就是如何解释智力本身。对这一问题的逐步深入破解也将会相应地改变人类的知识结构。　　生命科学研究不但依赖物理、化学知识，也依靠后者提供的仪器，如光学和电子显微镜、蛋白质电泳仪、超速离心机、X-射线仪、核磁共振分光计、正电子发射断层扫描仪等