染色体免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation，ChIP）是一种可在体内用来确定与某一特定蛋白结合或蛋白定位所在的特异性DNA序列的技术。方法程序如下图： 第一步：用甲醛在体内将DNA结合蛋白与DNA交联（DNA-binding proteins are crosslinked to DNA with formaldehyde in vivo.） 第二步：分离染色体（质），剪切后的DNA小片段与结合蛋白结合（Isolate the chromatin. Shear DNA along with bound proteins into small fragments.） 第三步：用特异性 抗体 与DAN结合蛋白结合，用沉淀法分离复合体。反向交联操作释放出DNA，并消化蛋白质（Bind antibodies specific to the DNA-binding protein to isolate the complex by precipitation. Reverse t

【目的要求】 1. 掌握α 1 -AT分离纯化各步骤原理、操作及鉴定方法 2. 掌握基本技术操作及 仪器 使用 3. 熟悉人血清蛋白质的分类方法,α 1 -AT性质 4. 了解生物大分子制备技术, 分离纯化类型 5. 学会利用学过的分离纯化方法进行基本的科研设计 6．练习研究论文基本写作 【教学内容一】 分段盐析法，凝胶过滤法（盐析法概念及原理，分段盐析概念，分子筛效应，柱层析基本技术） 【实验原理】 1. 盐析法是一种利用蛋白质在高盐溶液中溶解度不同而分离的方法。通过将硫酸铵加入蛋白质溶液中，使蛋白质表面电荷被中和，水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。 2. 通过分段改变盐类浓度达到分离目的的方法叫分段盐析法。 3. 凝胶过滤又称分子筛层析。混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙先被洗脱(阻力小,流程短,流速大),分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞,流速

一、实验目的 1.熟悉溶菌酶的功能、分布以及作用特性。 2.掌握溶菌酶的提取及活力测定方法。 二、实验原理 溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种碱性糖苷水解酶，能作用于细菌细胞壁的粘多糖，具有杀菌等作用，广泛应用于医学临床。 溶菌酶存在于植物浆及动物(蛋清、血浆、淋巴液和鼻粘膜等处)组织中，其中鸡蛋清中含量较为丰富，且鸡蛋清取材方便，因此实验室及实际生产中一般以鸡蛋清为原料进行溶菌酶的提取制备。 从鸡蛋清中分离溶菌酶可以选用多种不同的方法和步骤。本实验采用的分离纯化步骤为：等电点及热变性选择性沉淀→聚丙烯酸处理→葡聚糖凝胶柱层析→聚乙二醇浓缩。溶菌酶具有耐热性，在酸性条件下经受长时间高温处理而不丧失活性；而且溶菌酶又具有特别高的等电点，因此采用热变性与 等电点沉淀相结合的方法可除去大部分的杂蛋白。聚丙烯酸是一种多聚蛋白质，在酸性条件下可以与溶菌酶结合形成凝聚物；当有钙离子存在时溶菌酶又能从这种凝聚物中分离出来，同时生成丙烯酸钙沉淀，后者经过硫酸的酸化又重新形成聚丙烯酸。在实验中，一

一、实验目的 1.了解乳酸脱氢酶的生理作用。 2.掌握乳酸脱氢酶分离纯化的方法与步骤。 二、实验原理 DH 是一种普编存在的与代谢有关的酶。哺乳动物LDH 由两个不同的亚基结合组成，以五种四聚体的同工酶存在。这些同工酶在催化、物理和免疫性能方面是不同的。亚基以”H”和”M”表示，形成H 4 ，M 4 ，H 3 M，H 2 M 2 和HM 3 。在心肌中”H”亚基占优势，心肌适合于丙酮酸的需氧的氧化。在骨胳肌和肝中”M”亚基占优势，它与厌氧代谢和丙酮酸还原有较大关系。 三、 仪器 、原料和试剂 仪器 绞肉机，冷冻离心机，透析袋，冰水浴，冰箱，纱布，滤纸等。 原料 为猪或牛心，从已宰动物身上取出，立即用冰保藏，运回后，马上操作。 试剂 磷酸钙凝胶(现配现用)：4kg 滤碎心肌抽提液所需凝胶量制备如下：1L0.44moL／L 磷酸氢二钠在搅拌下，快速加入至1L0.66mol／L 氯化钙。混合物加浓氨水(

一、实验目的 1.掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理与方法。 2.深入了解血清胆固醇的性质及其在体内的代谢。 二、实验原理 血清经无水甲醇处理后蛋白质被沉淀，胆固醇则溶解在无水甲醇中。甲醇提取液与硫磷铁试剂反应后生成有色物质，其呈色度与胆固醇含量成正比，可于550nm 波长下进行比色测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在l10～220mg/100mL。 三、 仪器 和试剂 仪器 722分光光度计、台式离心机、具塞锥形瓶等。 试剂 1．1.0mg/mL 胆固醇贮存液：将100.0mg 胆固醇溶于100mL 无水甲醇中。 2. 0.02mg/mL 胆固醇工作掖：取2mL 胆固醇贮存液加98mL 无水甲醇。 3. 三氯化铁溶液：5.0g FeCl 3 ·6H 2 O 溶于200mL 浓磷酸中。 4. 磷硫铁 试剂 (P-S-Fe 试剂)：取40mL 的三氯化铁溶液用浓硫酸

(一)实验目的 1.熟习旋光仪的使用方法。 2.了解旋光仪测定淀粉的原理并掌握其具体方法。 (二)实验原理 淀粉(starch)是植物的主要能量贮藏物质，主要存在于种子、块根和块茎中。淀粉不仅是重要的营养物质，并且在工业上的应用也很广泛。 将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮，可使样品中淀粉轻度水解，同时由于钙离子与淀粉分子上的羟基络合，使淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(α)，旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。 应注意的是，酸性氯化钙溶液必须保持pH 值2.30，密度1.30，加时间的长短也要控制在一定范围，以保证各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］恒定不变(20℃)。样品中其他旋光性物质(如糖分)必须预先除去。 (三) 仪器 、原料和试剂 仪器 植物样品粉碎机、离心机、分析天平； 粗天平、旋光仪及附件、三角瓶、分样筛(100目

本实验通过 L-谷氨酸的测定学习华勃氏呼吸仪的使用方法。 二、实验原理 大肠杆菌菌体内含有L－谷氨酸脱羧酶，能专一的催化L－谷氨酸脱羧，释放出二氧化碳。华勃氏呼吸计法是一种微量检压技术，可用于测定微生物和组织代谢时所发生的气体量的改变，如氧的吸收和CO 2 的产生。在恒温、恒容情况下，如果华勃氏呼吸计所带瓶内气体的量发生改变，则引起压力的改变(如放出CO 2 时瓶内压力增加)，由测压计上压力的改变就可计算放出CO 2 的量(每分子L-谷氨酸产生一分子CO 2 )，进一步求出L-谷氨酸的量。 三、 仪器 、原料与试剂 仪器 刻度吸管(2mL，0.5m，0.2m，0.1mL)、 注射器(2mL)、华勃氏呼吸仪1台(附测压管与反应瓶)。 原料 1.大肠杆菌丙酮粉的制备 将纯化的大肠杆菌由试管斜面培养接种到10支200mL茄形瓶培养基上，于37℃培养16~18小时。 2.培养基的配方如下：

一、实验目的 掌握果胶提取的原理，学习胶冻制备的工艺。 二、实验原理 果胶是高分子糖类化合物，是一种植物性天然胶体物质，广泛地存在于苹果、山楂和柑桔类等的果实及其它植物体内。果胶在植物体中，以原果胶、果胶和果胶酸三种形式存在。 原果胶用稀酸处理或与果胶酶作用时可转为可溶性果胶。可溶性果胶的基本结构是多聚半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲醇脂化为甲氧基。一般植物中的果胶甲氧基含量，约占全部多聚半乳糖醛酸结构中可被脂化的羧基的 7～14％，甲氧基含量高于 7%的果胶，称为高甲氧基果胶，即普通果胶，甲氧基含量低于7％的果胶，几乎无胶凝力，但在多价离子钙、镁、铝等离子存在时可生成胶冻。多价离子起了果胶分子交联剂的作用。 果胶为白色或淡黄褐色粉末。溶于水或粘稠状液体，对石蕊试纸呈酸性，果胶与糖和有机酸一起煮，可形成有弹性胶冻，基于此特性，果胶用于食品工业制造果酱、果冻、糖果、冰淇淋，雪糕等。 在医药工业中果胶可作为肠出血的止血剂。低甲氧基果胶能与金属离子形成不溶于水的化合物，是铅、汞、钴等金属的良好解毒剂和预防剂。

一、目的： 谷物是人类特别是发展中国家人民的主要蛋白质来源，谷物中蛋白质含量是衡量其品质和营养价值的最重要的指标。培育高蛋白谷物品种，是广大育种工作者的奋斗目标。 对现有谷物进行评价、利用，对大批原始材料（种质资源）及育成品系进行品质筛选，都需要测定种子蛋白质含量。测定种子蛋白质含量的方法很多，一般可分为间接方法和直接方法两大类。凯氏定氮法是间接方法中的一种，国际谷物化学协会（ICC）、美国分析化学协会 ( AOAC）、美国谷物化学协会（AACC）等及不少国家都把凯氏定氮法定为标准法。通过本实验学习凯氏定氮法的原理，掌握样品的处理和自动凯氏定氮仪的操作。 二、原理 根据蛋白质的含氮量比较恒定，平均约为16% ，通过测定样品的含氮量进而推算蛋白质的含量。种子中的氮化物可分为蛋白氮和非蛋白氮。用三氯乙酸溶出种子粉或脱脂种子粉中的非蛋白氮化物（氨基酸、酞胺和无机氮），沉淀样品中的蛋白质并使二者分离。在催化剂参与下，用浓硫酸消煮分解样品，使蛋白氮转化为氨态氮，并与硫酸结合生成硫酸按。加碱蒸馏，使氨释放出来并吸收于一定量的硼酸中，再用标

一、实验目的 1.熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应和两性反应及其机理。 2.掌握蛋白质等电点的测定方法及其原理。 3.掌握蛋白质电荷的测定方法及其机理。 二、实验原理 (一)蛋白质的沉淀反应原理 蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如—NH 3 + ，—COO-，—SH，—CONH 2 等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易被蛋白质吸住，在蛋白质颗粒外面形成一层水膜(又称水化层)。水膜的存在使蛋白颗粒相互隔开，颗粒之间不会碰撞而聚成大颗粒。因此蛋白质在溶液中比较稳定而不会沉淀。蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因，是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电荷，使蛋白质颗粒之间相互排斥，保持一定距离，不致相互凝集沉淀。 蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。当某些物理化学因素破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。 蛋白质

一、目的 氨基酸是蛋白质的基本结构单位。构成蛋白质的氨基酸共20 种，其中Lys、Phe、Trp 、val、Leu、Ile、The、Met 等8 种是人体的必需氨基酸，必需由蛋白类食物供给。不同食品的蛋白质含量不同，氨基酸组成也有差异，其必需氨基酸的含量是否平衡，对营养品质有很大影响。氨基酸组成分析又是蛋白质顺序分析的重要组成部分，因此，氨基酸组分分析是常用的重要分析项目。通过本实验了解氨基酸分析仪的结构及工作原理，学习待测样品的处理方法。 二、原理 种子蛋白质在110℃条件下，经5.7mol / L 恒沸点盐酸作用22-24h，被水解生成组成该蛋白质的各种游离氨基酸（色氨酸破坏，天冬酰胺和谷氨酰胺分别转变成天冬氨酸和谷氨酸），经上机前处理即可用氨基酸分析仪测定出各种氨基酸的含量。 三、 仪器 、试剂和材料 1． 仪器 1）水解试管 2）喷灯 3）台式高速离心机 4 ) 121MB 或其他型号氨基酸自动分析仪 2． 试剂 ( 1 ) 5

目的和要求 1.了解各种去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响 2 .学会制备红血球细胞 原理 多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。 血红蛋白在540nm有特异吸收峰。去污剂作用后的无细胞膜溶液于540nm处的A值大小可以表示其红血球细胞对不同去污剂的敏感性。 步骤 1.红血球等渗溶液的制备 取已加抗凝剂的猪血2.5mL，加生理盐水10.0mL，离心20方针（2000rpm），收集沉下的红血球，用生理盐水洗涤一次（5mL），再离心20分钟（2500rpm），收集沉淀，加10mL生理盐水，悬浮红血球，即为红血球等渗溶液，备用。 2.取4支 试管 各加0.2mL红血球等渗溶液，分别对应加入10.0g/L的Triton X-100，Brij58，CTAB，SDS 5mL，小心混匀，2500rpm离心20分钟，收集上清液，测540nm的A值（以相同操作，不含红血球的去污剂作参比）。 以Triton X-100的A

一、实验目的 1．掌握淀粉的提取方法， 2．熟悉淀粉跟碘的反应和淀粉水解生成葡萄糖的反应。 二、实验原理 淀粉主要由直链淀粉(约占20％)和支链淀粉(约占80％)组成。直链淀粉能溶于热水，跟碘作用显现蓝色。支链淀粉不溶于水，但能在水中胀大而润湿、跟碘作用显现紫红色。酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉在稀酸作用下能发生水解，生成一系列产物，最后得到葡萄糖。 三、 仪器 和试剂 仪器 植物样品粉碎机、离心机、分析天平、粗天平、量筒、三角瓶；分样筛(100目)、布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵、离心管、小电炉；烧杯、三脚架、石棉网、滴管。 试剂 1 .乙醚 2. 80%的乙醇 3. 含有氯化汞的乙醇溶液 4. 醋酸氯化钙溶液 5. 30％ZnSO 4 6. 15％K 4 Fe(CN) 7. 95％乙醇

实验原理 黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。标准品选用芦丁。 试剂 和器材 一、 试剂 芦丁标准品。 5％NaNO 2 ；10%A1(NO 3 ) 3 ；5％NaOH；70％乙醇。 二、材料 新鲜银杏叶。 三、器材 容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管0.5ml（×2），1ml（×2），2ml

实验原理 维生素B 2 （核黄素）在440~500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素B 2 的浓度成正比。利用硅镁吸附剂对维生素B 2 的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱维生素B 2 , 测定其荧光强度。试液再加入连二亚硫酸钠（Na 2 S 2 O 4 ），将维生素B2还原为无荧光的物质，再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中维生素B2所产生的荧光强度。 试剂 和器材 一、 试剂 0.1 mol/L盐酸; 1 mol/L氢氧化钠; 0.1 mol/L氢氧化钠; 20%(w/v)连二亚硫酸钠溶液; 洗脱液：丙酮+冰醋酸+水（5+2+9）; 0.04%溴甲酚绿指示剂; 3%（v/v）高锰酸钾溶液; 3%(v/v)过氧化氢溶液；2.5mol/L无水乙酸钠溶液；硅镁吸附剂：60~100目，sig

【原理】 维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟化合物，属水溶性维生素。维生素C具有很强的还原性。在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。一些重金属离子（如铜离子），也可使维生素C氧化。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2,6-二氯酚靛酚。同时维生素C氧化成脱氢维生素C。 氧化型的2,6-二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。被还原后即失去红色。在滴定过程中，当溶液中维生素C一旦被氧化完。则再滴下的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。所以，溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。从滴定时2,6-二氯酚靛酚标准溶液的消耗量，可以计算出被检物质中维生素C的含量。 【操作】 1．取萝卜或其它蔬菜5g，放入研钵中剪碎，加5%醋酸2~3mL，研磨成匀浆，再加5%醋酸至25mL，研匀，浸提5分钟，棉花过滤。 2．取滤液2mL注入50mL锥形瓶内，用0.0005M2,6-二氯酚靛酚滴定至浅红色（15秒不褪色），记录用量。按消耗2,6-二氯酚靛酚的毫升数计算

一．实验目的 学习一种人工合成模拟过氧化物酶的方法，了解柱子型固定酶的原理以及感性认识酶分析法的一些应用。 二．实验原理 过氧化物酶的辅基是血红素。在体外将血红素与牛血清白蛋白结合制备成含血红素的蛋白质分子作为模拟过氧化物酶。在确定血红素与牛血清白蛋白结合后，检测其的过氧化物酶活性。然后将此人工模拟酶固定在载体琼脂糖凝胶（Sepharose 4B）上并装柱，应用于检测样品中痕量过氧化氢的含量，因为过氧化氢的测定不论是在临床生物化学还是在环境化学和 食品工业中都具有重要意义。 血红素是一活性分子，而血清白蛋白具有极强吸附能力，所以两者能结合。由于含有血红素，该结合物就具有过氧化物酶的特性。琼脂糖凝胶在激活后能很好的吸附蛋白质分子从而把蛋白质分子（模拟过氧化物酶）固定。过氧化物酶能极敏感的催化过氧化氢分解从而使邻苯二胺变成有色物质2，3-二氨基吩嗪，反应如下： 产物2，3-二氨基吩嗪在428nm处有光吸收峰，所以能以此反应来测定过氧化物酶的活性和检测过氧化氢的含量。 三．主要 仪器 与试

实验原理 葡聚糖凝胶（Sephadex）过滤法测定蛋白质分子量的原理，主要是依据这种凝胶具有分子筛作用，一定型号的凝胶具有大体上一定大小的孔径。在一定的凝胶柱内，凝胶孔隙所占的体积称为内水容积Vi，凝胶颗粒间的自由空间所占的体积称为外水容积V0。当样品流经凝胶柱时，大于孔隙的大分子完全不滲入到凝胶内部，只需V0体积的洗脱液便可将其由一端洗脱到另一端；相反，如果样品体积小于孔隙，则需要V0＋Vi体积的洗脱液，才能将它们由一端洗脱到另一端。中等分子（分子大小在上述两种极限之间）所需洗脱液体积介于两者之间，Ve＝V0＋KdVi（0<1），如图4.1所示。 Kd为分配系数，它表示一种物质在孔隙内的滲透程度，相当于这种物质在孔隙内所占体积和孔隙总体积的比值。 如果假定蛋白质分子近于球形，同时没有显著的水合作用，则不同大小分子量的蛋白质，进入凝胶筛孔的程度不同，其洗脱体积决定于分子大小。当蛋白质分子量在10000～15000时，蛋白质在葡聚糖凝胶柱上层析的洗脱体积和分子量的对数呈直线关系。若用已知分子量的标准蛋白质在一定型号葡聚糖凝

目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 实验原理 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。 在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 一、 试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS） 试剂 ：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为2.0mg/mL。 6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500mL。 碘－碘

实验原理 酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。此过程与无机磷将糖磷酸化有关。 本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸络合物能被还原剂α－1，2，4－氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝的原理来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，用以观察发酵过程中无机磷的消耗。 试剂 和器材 试剂 蔗糖；5％三氯乙酸；3mol/L硫酸和2.5％钼酸铵等体积混合液。 磷酸盐溶液：称取Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 120.7g(或Na 2 HPO 4 ·2H 2 O 60g)和KH 2 PO 4 20g溶解于 蒸馏水中，定容至1000mL，在冰箱中贮存备用。临用前稀释适当倍数。 标准磷酸盐溶液：将磷酸氢二钾（KH 2 PO 4 ）在110℃烘箱中烘干2小时，冷却后准确称取0.1098g，用蒸馏水溶解，定容到100