上皮组织（epithelial tissue）由密集的细胞组成，细胞形状较规则，细胞间质很少，大部分上皮覆盖于身体表面和衬贴在有腔器官的腔面，称被覆上皮。有些上皮构成腺，称腺上皮。上皮组织的细胞呈现明显的极性（polarity），即细胞的两端在结构和功能上具有明显的差别。上皮细胞的一面朝向身体表面或有腔器官的腔面，称游离面；与游离面相对的另一面朝向深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞基底面附着于基膜，基膜是一薄膜，上皮细胞借此膜与结缔组织相连。上皮组织中没有血管，细胞所需的营养依靠结缔组织内的血管透过基膜供给。位于身体不同部位和不同器官的上皮，面临不同的环境，功能也不相同，细胞顶部常具有不同的结构，以适应各自的功能需要。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等功能，位于身体不同部位和器官的上皮常以某种功能为主。如身体表面上皮的功能主要为保护作用，而消化管腔面的上皮除有保护作用外，还有吸收和分泌功能。腺上皮的功能主要是分泌。有的器官的一些上皮细胞特化为有收缩能力的细胞，称肌上皮细胞（myoepithelial cell）。有些部位的一些上皮细胞能感受某种物理或化学性的刺激，则

结缔组织（connective tissue）由细胞和大量细胞间质构成，结缔组织的细胞间质包括基质、细丝状的纤维和不断循环更新的组织液，具有重要功能意义。细胞散居于细胞间质内，分布无极性。广义的结缔组织,包括液状的血液、松软的固有结缔组织和较坚固的软骨与骨；一般所说的结缔组织仅指固有结缔组织而言。结缔组织在体内广泛分布，具有连接、支持、营养、保护等多种功能。 结缔组织均起源于胚胎时期的间充质（mesenchyme）。间充质由间充质细胞和大量稀薄的无定形基质构成。间充质细胞呈星状，细胞间以突起相互连接成网，核大，核仁明显，胞质弱嗜碱性（图3－1）。间充质细胞分化程度低，在胚胎时期能分化成各种结缔细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。成体结缔组织内仍保留少量未分化的间质细胞。 目录 • 疏松结缔组织 • 致密结缔组织 • 脂肪组织 • 网状组织 疏松结缔组织 编辑本段 回目录 疏松结缔组织（loose connective tissue）又称蜂窝组织（

循环系统（Circulatory system）是封闭的管道系统，它包括心血管系统和淋巴管系统两部分。心血管系统是一个完整的循环管道，它以心脏为中心通过血管与全身各器官、组织相连，血液在其中循环流动；淋巴管系统则是一个单向的回流管道，它以毛细淋巴管盲端起源于组织细胞间隙，吸收组织液形成淋巴液，淋巴液在淋巴管内向心流动，沿途经过若干淋巴结，并获得淋巴球和浆细胞，最后汇集成左、右淋巴导管开口于静脉。 循环系统的主要机能是①把机体从外界摄取的氧气和营养物质送到全身各部，供给组织进行新陈代谢之用，同时把全身各部组织的代谢产物，如CO2、尿素等，分别运送到肺、肾和皮肤等处排出体外，从而维持人体的新陈代谢和内环境的稳定；②它还将为数众多的与生命活动调节有关物质（如激素）运送到相应的器官，以调制各器官的活动；③淋巴系是组织液回收的第二条渠道，既是静脉系的辅助系统，又是抗体防御系统的一环。 一、心脏 心脏heart位于胸腔的纵隔内，膈肌中心腱的上方，夹在两侧胸膜囊之间。其所在位置相当于第2-6肋软骨或第5-8胸椎之间的范围。整个心脏2/3偏在身体正

皮肤（skin）的面积为1.2－2m2,约占体重的8%，是个面积广大的器官。皮肤由表皮和真皮组成，借皮下组织与深部的组织相连。皮肤内有毛、指（趾）甲、皮脂腺和汗腺，它们是由表皮衍生的皮肤附属器。皮肤直接与外界环境接触，对人体有重要的保护作用，能阻挡异物和病原体侵入，并能防止体内组织液丢失。皮肤内有丰富的感觉神经末梢，能感受外界的多种刺激。此外，皮肤对调节体温也起重要作用。 目录 • 表皮 • 真皮 • 皮下组织 • 皮肤的附属器 • 皮肤的再生 [显示部分] [显示全部] 表皮 编辑本段 回目录 表皮（epidermis）是皮肤的浅层，由角化的复层扁平上皮构成。人体各部位的表皮厚薄不等，一般厚0.07～0.12mm，手掌和足蹠最厚，约0.8～1.5mm。表皮由两类细胞组成:一类是角蛋白形成细胞（keratinocyte），占表皮细胞的绝大多数，它们在分化中合成大量角蛋白，细胞角化并脱落；另一类细胞为非角蛋白形成细胞，数量少，

呼吸系统respiratory system是执行机体和外界进行气体交换的器官，由呼吸道和肺二部分组成（图2-28）。呼吸道包括鼻腔、咽、喉、气管和支气管，临床上将鼻腔、咽、喉叫上呼吸道，气管和支气管叫下呼吸道，呼吸道的壁内有骨或软骨支持以保证气流的畅通。肺主要由支气管反复分支及其末端形成的肺泡共同构成，气体进入肺泡内，在此与肺泡周围的毛细血管内的血液进行气体交换。吸入空气中的氧气，透过肺泡进入毛细血管，通过血液循环，输送到全身各个器官组织，供给各器官氧化过程的所需，各器官组织产生的代谢产物，如CO2再经过血液循环运送到肺，然后经呼吸道呼出体外。 一、鼻 鼻nose是呼吸道的起始部分，能净化吸入的空气并调节其温度和湿度，它也是嗅觉器官，还可辅助发音。鼻包括外鼻、鼻腔和鼻旁窦三部分。 1．外鼻 外鼻是指突出于面部的部分，由骨和软骨为支架，外面覆以皮肤构成。上端较窄，位于两眼之间叫鼻根，下端高突的部分叫鼻尖，中央的隆起部叫鼻背，鼻尖两侧向外方膨隆的部分叫鼻翼。 鼻尖和鼻翼处的皮肤较厚，富含皮脂腺和汗腺，与深部皮下

泌尿系统urinary system由肾、输尿管、膀胱和尿道组成。机体在新陈代谢过程中所产生的废物（尿素、尿酸、无机盐等）及过剩的水分，需要不断地经血液循环送到排泄器官排出体外，排泄的渠道有二；一是经皮肤汗腺形成汗液排出，二是通过肾形成尿再经排尿管道排出。经过肾排出的废物数量大、种类多。肾不仅是排泄器官，它对维持体内电解质平衡也有重要作用。 一、肾 肾Kidney是实质性器官，左右各一，呈于是豆形，新鲜肾呈红褐色。位于腹后壁脊柱两侧，上端平第11-12胸椎体，下端平第3腰椎，后面贴腹后壁机，前面被腹膜覆盖。 肾的内侧缘中部是血管、淋巴管、神经和肾盂出入肾的门户。从肾的冠状剖面上（图2-36），肉眼可见肾实质分为皮质和髓质两个部分。皮质位于浅层，富含血管，呈红褐色。肾髓质位于深部，色淡呈锥体形，叫肾锥体，锥体的尖端钝圆叫肾乳头。 肾实质主要由许多肾单位组成，一个肾单位包括肾小体和肾小管两部分，肾小体是由血管球（一团蟠曲的动脉性毛细血管球）和包在血管球外面的肾小囊（肾小管盲端凹陷而成的杯状双层囊）构成，是泌尿部分，位于肾皮质

男性生殖系统male genital system包括内生殖器和外生殖器二个部分。内生殖器由生殖腺（睾丸）、输精管道（附睾、输精管、射精管和尿道）和附属腺（精囊腺、前列腺、尿道球腺）组成。外生殖器包括阴囊和阴茎。 睾丸是产生精子和分泌男性激素的器官，睾丸产生的精子，贮存于附睾和输精管内，当射精时经射精管和尿道排体外。附属腺分泌的液体与精子相混合构成精液，以增加精子的活动，并供给其营养。 一、生殖腺－睾丸 睾丸testis位于阴囊内，左右各一。睾丸的表面包被致密结缔组织构成的被膜叫白膜。在睾丸后缘，白膜增厚并突入睾丸实质内形成放射状的小隔，把睾丸实质分隔成许多锥体形的睾丸小叶，每个小叶内含2-3条曲细精管，曲细精管的上皮是产生精子的场所。曲细精管之间的结缔组织内有间质细胞，可分泌男性激素。曲细精管在睾丸小叶的尖端处汇合成直细精管再互相交织成网，最后在睾丸后缘发出十多条输出小管进入附睾。 二、附睾、输精管和射精管 1．附睾epididymis紧贴睾丸的上端和后缘，可分为头、体、尾三部。头部由输出小管蟠曲而成，输出

女性生殖系统female genital system包括内生殖器和外生殖器二个部分。内生殖器（图2-41）由生殖腺（卵巢）、输卵管道（输卵管、子宫、阴道）和附属腺（前庭大腺）组成。外生殖器即女阴。 女性内生殖器全貌 卵巢是产生卵细胞和分泌女性激素的器官。成熟的卵细胞从卵巢表面排出，经腹膜腔进入输卵管，在管内受精后移至子宫内膜发育生长，成熟的胎儿于分娩时经阴道娩出。 一、生殖腺──卵巢 卵巢ovary呈扁椭圆形，左右成对。在小骨盆上口平面，贴靠骨盆侧壁。 卵巢是实质性器官，可分为浅层的皮质和深层的髓质。皮质内藏有胚胎时期已生成的数以万计的原始卵泡，性成熟期之后，成熟的卵泡破溃后将卵细胞排出。一般在每一月经周期（28天）排一个卵细胞。 卵巢的形状、大小因年龄而异。幼年卵巢小而光滑，成年后卵巢增大并由于每次排卵后在卵巢表面留有瘢痕而显得凹凸不平，更年期后卵巢萎缩

胚胎学（embryology）是研究个体发生和生长及其发育机理的科学，其研究内容包括生殖细胞形成、受精、胚胎发育、胚胎与母体的关系、先天性畸形等。人体胚胎学（human embryology）则是研究人胚胎的发育过程。机体出生后，许多器官的结构和功能还远未发育完善，还要历经相当长时期的生长发育方能成熟。然后逐渐老化衰退。这一过程可分为婴儿期、儿童期、少年期、青年期、成年期和老年期。研究出生前和出生后生命全进程的科学则称人体发育学（development of human）。 胚胎学包括以下几个主要分支学科。①描述胚胎学（descriptive embryology）：主要应用组织学与与解剖学方法（包括光镜、电镜等技术）研究胚胎发育的形态演变及其规律，是胚胎学的基础内容 。②比较胚胎学（comparative embryology）：以比较不同种系动物（包括人类）的胚胎发育为研究内容。为探讨生物演变和进化过程及其内在联系提供依据，并有助于更深地理解人体的发育。③实验胚胎学（experimental embryology）：对胚胎或体外培养的胚胎组织给予化学或

神经系统起源于神经外胚层，由神经管和神嵴分化而成。 目录 • 神经管和神经嵴的发生和早期分化 • 脊髓的发生 • 脑的发生 • 神经节和周围神经的发生 • 垂体的松果体的发生 • 眼的发生 • 耳的发生 • 神经系统的常畸形 [显示部分] [显示全部] 神经管和神经嵴的发生和早期分化 编辑本段 回目录 人胚第3周初，在脊索的诱导下，出现了由神经外胚层构成的神经板。随着脊索的延长，神经板也逐渐长大并形成神经沟。在相当于枕部体节的平面上，神经沟首先愈合成管，愈合过程向头、尾两端进展，最后在头尾两端各有一开口，分别称前神经孔（ anterior neuropore）和后神经孔（posterior neuropore）。胚胎第25天左右，前神经孔闭合，第27天左右，后神经孔闭合，完整的神经管形成。神经管的前段膨大，衍化为脑；后段较细，衍化为脑；后段较细，衍化为脊髓。 在由神

神经内分泌学是一门由神经科学和内分泌学形成的交叉学科，目的在研究中枢神经系统-垂体-外周内分泌系统的调节及其反馈机制，以了解和阐明中枢与外周神经体液稳态及其失常与疾病的关系(图9-1)。外周内分泌腺主要包括性腺、肾上腺和甲状腺。中枢神经-垂体、卵巢和外周内分泌对女性个体的发育、生长、成熟、生殖、衰老等生理过程进行极为复杂而精密的调控。 目录 • 下丘脑的神经内分泌结构 • 甾体激素与神经甾体 • 下丘脑对垂体激素分泌的调控与生殖的关系 • 下丘脑对神经垂体系统的调控 下丘脑的神经内分泌结构 编辑本段 回目录 下丘脑是中枢神经系统非常重要的组成部分。下丘脑通常分为内侧、外侧和室周三个带(zone)，其中内侧带和室周带含与内分泌系统中枢调节有关的大部结构。 到达下丘脑核的神经连结，分为上升传入支和下降传入支。上升传入支起自尾髓到中脑前部脑干的不同水平，下降传入支源于前脑的基底结构、嗅结节、中隔、梨状皮质、杏仁核和海马。从视网膜到达下丘脑

内分泌系统（endocrine system）是机体的重要调节系统，它与神经系统相辅相成，共同调节机体的生长发育和各种代谢，维持内环境的稳定，并影响行为和控制生殖等。内分泌系统由内分泌腺和分布于其它器官的内分泌细胞组成。内分泌细胞的分泌物称激素（hormone）。大多数内分泌细胞分泌的激素通过血液循环作用于远处的特定细胞，少部分内分泌细胞的分泌物可直接作用于邻近的细胞，称此为旁分泌（paracrine）。内分泌腺的结构特点是：腺细胞排列成索状、团状或围成泡状，不具排送分泌物的导管，毛细血管丰富。 内分泌细胞分泌的激素，按其化学性质分为含氮激素（包括氨基酸衍生物、胺类、肽类和蛋白质类激素）和类固醇激素两大类。分泌含氨激素细胞的超微结构特点是，胞质内含有与合成激素有关的粗面内质网和高尔基复合体，以及有膜包被的分泌颗粒等。分泌类固醇激素细胞的超微结构特点是，胞质内含有与合成类固醇激素有关的丰富的滑面内质网，但不形成分泌颗粒；线粒体较多，其嵴多呈管状；胞质内还有较多的脂滴，其中的胆固醇等为合成激素的原料。 每种激素作用于一定器官或器官内的某类细胞，称为

一、 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。 二、 选择正确的酶 不言而喻，选择的酶在底物DNA上必须至少有一个相应的识别位点。识别碱基数目少的酶比碱基数目多的酶更频繁地切割底物。假设一个GC含量50%的DNA链，一个识别4个碱基的酶将平均在每44（256）个碱基中切割一次；而一个识别6个碱基的酶将平均在每46（4096）碱基切割一次。内切酶的产物可以是粘端的（3′或5′突出端），也可以是平端的片段。粘端产物可以与相容的其它内切酶产物连接，而所有的平端产物都可以互相连接。相关信息参见目录的Compatible Cohesive Ends And

一.九种表达载体 Pllp-OmpA,pllp-STII,pMBP-P,pMBP-C, pET-GST,pET-Trx,pET-His,pET-CKS,pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19RDNA pUC57DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescriptIIKS( ) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFus

概 述 一. DNA 的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA 分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA 的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4 至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'),有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA 片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链

碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们.在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭合环状质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起.当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成 状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去. [仪器,材料与试剂] 仪器 恒温培养箱 恒温摇床 台式离心机 高压灭菌锅 材料 1.葡萄糖 2.三羟甲基氨基甲烷(Tris) 3.乙二胺四乙酸(EDTA) 4.氢氧化钠 5

一、目的及要求 1． 掌握提取基因组DNA的原理和方法、步骤。 2． 了解相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。 二、实验原理 制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。 根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则：（1）防止和抑制DNase对DNA的降解；（2）尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。在ED

（一）碱变性法提取质粒dna 　　质粒(plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状dna。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒dna探针技术及检测质粒的pcr技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。 　　分离和纯化质粒dna的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒dna的扩增，细菌菌体的裂解;质粒dna的提取与纯化。 　　本实验学习用碱变性方法提取质粒dna。 　　【原理】 　　细菌培养物加入sds和naoh碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒dna、染色体dna和rna一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（eb）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。

1.醋酸纤维素薄膜电泳：醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯，由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质吸附小，能消除电泳中出现的“托尾”现象。具有分离速度快、样品用量小的特点。适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 　　2.凝胶电泳：以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。医学教|育网搜集整理琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。 　　3.等电聚焦电泳：等电聚焦是利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术，特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分，在区带电泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等。 　　4.毛细管电泳：利用电泳和电渗流的电动力学原理，在一种空芯的微小内径的毛细管中进行混合物的高效分离技术。毛细管电泳可分为：毛细管自由

洗脱产物的 DNA量很少或没有常见问题 可能原因 建议解决方案所提样品材料老化或反复冻融导致基因组DNA含量下降应选择新鲜的样品材料，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等，不能及时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存，以免DNA降解。样品破壁或裂解不完全导致基因组DNA未充分释放动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆，G+细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、酵母破壁酶或机械方式协助破壁，不同样品的细胞破壁方式可参照前面的详细介绍。样品量过多导致细胞裂解不充分加样量过多使裂解液和样品混合不均匀，细胞裂解不充分。不同来源样品的加样量请参照详细操作步骤。 DNA吸附不充分如在上吸附柱前未加无水乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇，则导致DNA不能充分沉淀，与硅胶膜吸附不彻底，因此应在样品裂解后加适量无水乙醇，再上吸附柱使DNA与硅胶膜充分吸附。 DNA洗脱不适当洗脱液pH值过低会降低洗脱效率，应确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间；洗脱体积若小于30μl，则不易完全浸透硅胶膜，使DNA不能全部洗脱下来