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一、步骤1、固定PBS 5min×3 次 振荡洗涤制作好的细胞爬片。固定液覆盖细胞，RT 静置 15 min。PBS 5min×3 次 振荡洗涤。2、通透化通透液覆盖细胞，RT 静置 30 min。PBS 5min×3 次 振荡洗涤。3、封闭封闭液覆盖标本表面 37℃ 孵育 1 h。4、一抗孵育一抗以合适浓度稀释 PBS ，覆盖标本表面。4℃ 孵育过夜，第二天 37℃ 复温 1 h。PBS 5min×3 次 振荡洗涤。5、二抗孵育FITC 标记二抗以合适浓度稀释于 PBS，覆盖标本表面。37℃ 避光孵育 < 60min。PBS 5min×3 次 避光 振荡洗涤。6、染核新鲜稀释 Hoechst 覆盖细胞表面，RT避光静置 < 10min。PBS 5min×3 次 避光 振荡洗涤。7、封片在干净的载玻片上滴一滴封片剂，将爬片的细胞面扣在封片剂上。8、镜检镜检，4℃ 避光保存。 二、注意事项1、细胞密度要合适，状态较好。2、从孵育二抗开始要避光(关闭室内日光灯即可)。3、完成后最好及时镜检、照相;分别用不同波长激发荧光，在 Photoshop 软件下合成一张图。 三、试剂配制1

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