相关专题 实验目的 从新鲜的小鼠肝脏中提取基因组DNA，为southern杂交或DNA文库 的构建做好准备。 我们重点是要保证DNA的序列、产率和纯度，去除Dnase、机械剪切 （对于如此之大的基因组 ，防止机械剪切是很重要的）、物理、化学因素的影响。 实验原理及过程 实验步骤 实验原理 1 将饥饿一天的小鼠用脊髓脱臼法处死。 饥饿一天是为了减少肝中的糖原，以免在提取DNA时糖的去除有太多困难。（试剂CTBA可以去除糖原） 2 0.2g鼠肝，冰冷生理盐水洗3次，剪碎 当组织离开机体，DNA酶就会表现出活性。在冰冷的生理盐水中，可以降低DNA酶的活性，防止基因组 DNA被降解。 因为DNA并没有提出来，所以在这时重要的是防止DNA酶对基因组 DNA的影响。 3 碎鼠肝转入玻璃匀浆器中，加入2mL匀浆液，匀浆6次（冰上操作）。 只

相关专题 一、实验目的 掌握植物 总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物 的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。 十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜 和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。 三、实验材料

相关专题 5.1实验原理 5.1.1聚合酶链式反应（PCR ）的基本构成 PCR指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用，包括用于DNA作图、DNA测序 、分子系统遗传学等。 PCR 基本原理是以单链DNA为模板，4种dNTP为底物，在模板3’末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增的DNA片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA膜板、四种dNTP溶液、耐热Taq DNA聚合酶、Mg2+等。反应时先将上述溶液加热，使模板DNA在高温下变性，双链解开为单链状态；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在Taq DNA聚合酶的催化下，以dNTP为原料，引物沿5’→3’方向延伸，形成新的DNA片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，

相关专题 6.1实验原理 DNA片段的分离与回收是基因工程 操作中一项重要的技术，如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针，回收PCR产物用于再次鉴定等。理想的DNA片段回收方法应满足以下几个要求： （1）回收片段应有非常高的纯度 如从普通凝胶中分离出来的片段不可带有即使是微量的凝胶――凝胶会抑制大部分的酶活力，对于后续DNA片段用于再酶切分析或连接均是不利的。 （2）回收过程必须是严格的无DNA酶污染的操作过程 衡量的Dnase均可能使回收的目的DNA片段降解，当降解作用仅发生在粘性末端时，在凝胶电泳中是无法看到回收的DNA片段有任何差异，但会导致DNA连接 实验的失败，最终影响后续的克隆实验。 （3）能回收不同大小的DNA片段 对于采用的回收方法必须能对不同大小的DNA片段均能回收，当回收大片段时不发生机械性损伤与断裂作用，造成大片段断裂。 （4）回收效率要高 回收方法要能对微量DNA也能进行操作，也即回收效率相对要较高，则对于实验中获得的非常微量的DNA样品也可进行分析。 （5）操作简单

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PCR扩增反应完成之后，必须通过严格的鉴定，才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法，能判断产物的大小，有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，前者主要用于DNA片段大于100 bp者，后者主要用来检测小片段DNA。 1. 琼脂糖凝胶电泳 这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小的DNA分子通过琼脂糖凝胶时，由于泳动速度不同而被分离，经溴化乙锭（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子发出荧光而判定其分子的大小。 用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%—2%，应该使用纯度高的电泳纯级琼脂糖，这种琼脂糖已除去了荧光抑制剂及核酸酶等杂质。 （1）制胶 琼脂糖凝胶厚度约为3~5 mm。过薄则加样孔样品会溢出来，过厚观察时荧光穿透不强以至有些小片段DNA带型不易分辨。如配制2%凝胶100 ml，称取琼脂糖2 g于三角瓶中，加入100 ml 0.5×TBE液，微波炉加热2-5 min，使琼脂糖完全溶

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